急慢性酒精中毒大鼠腦組織Ngb、HIF-1α、Epo表達(dá)及神經(jīng)元凋亡與TSAH死亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血(TSAH)是一種不同于與腦挫傷所致的蛛網(wǎng)膜下腔出血和病理性蛛網(wǎng)膜下腔出血的獨立腦蛛網(wǎng)膜下腔出血，外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血與外傷性硬腦膜外出血、硬腦膜下腔出血并列為外傷性顱內(nèi)三大腔隙出血。本研究旨在前期所建立的大鼠灌酒后TSAH模型基礎(chǔ)上，觀察腦組織腦紅蛋白(Ngb)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)、促紅細(xì)胞生成素（Epo）等腦組織氧代謝指標(biāo)的表達(dá)，及凋亡因子Bcl-2、Bax，腦組織細(xì)胞凋亡、暗神經(jīng)元數(shù)量的變化

2、，探討急慢性酒精中毒對腦組織形態(tài)、代謝和功能的影響，及TSAH 高死亡率的相關(guān)機(jī)制，以期為此類案件的法醫(yī)學(xué)鑒定和臨床防治提供科學(xué)理論依據(jù)。
　　 方法：動物及分組：雄性SD大鼠80只，體重300-400g，常規(guī)分籠飼養(yǎng)，隨機(jī)分組。急性灌酒模型：40只大鼠隨機(jī)分：急性灌酒組，一次性胃內(nèi)灌酒（北京紅星酒廠二鍋頭，52％v/v）15ml/kg；急性灌水組，灌同等量的自來水；再分別于灌酒或灌水后2h，給予腦震蕩性打擊，建立灌酒打擊組和灌

3、水打擊組模型，每組各10只。慢性灌酒模型：40只大鼠隨機(jī)分：慢性灌酒組和灌水組，給予灌酒(北京紅星酒廠二鍋頭，52％v/v)或灌水四周，每天9:00和15:00間隔6小時灌兩次，前2周每次灌8ml/kg、后2周每次灌12ml/kg。最后一次灌酒和灌水后2h，給予腦震蕩性打擊，建立灌酒打擊組和灌水打擊組明顯，每組各10只。未打擊組于灌胃后2h，打擊組于打擊后0.5h，開胸暴露心臟，經(jīng)左心室-主動脈插管，直接灌注4％中性多聚甲醛液處死兼固定

4、，剪開右心耳放血。約0.5h 后開顱取全腦，水沖洗后，置于4％中性多聚甲醛固定6 小時，脫水、浸蠟、包埋，常規(guī)制作石蠟組織切片厚約5um，分別HE 染色觀察腦組織形態(tài)變化，Ngb，HIF-1α，Epo，Bcl-2 和Bax 免疫組織化學(xué)染色，及TUNEL 標(biāo)記細(xì)胞凋亡，觀察其表達(dá)情況。病理真彩色圖像分析系統(tǒng)4.0 進(jìn)行體視量化病理學(xué)觀測，實驗數(shù)據(jù)用SPSS15.0 統(tǒng)計軟件(ANONA)及Excel 進(jìn)行分析處理。
　　 結(jié)果：

5、⑴急性灌酒后2h時大鼠血酒精濃度114.67±67.37 mg/dL，灌酒后短時間內(nèi)，大鼠興奮性較強(qiáng)、步態(tài)不穩(wěn)，不?？繅ψ邉?；0.5 h后逐漸出現(xiàn)側(cè)臥、翻正反射消失、昏睡、呼吸緩慢等急性酒精中毒表現(xiàn)。⑵急性灌酒打擊組大鼠TSAH 發(fā)生率20％，無死亡。慢性灌酒打擊組的TSAH發(fā)生率50％，死亡率約40％。急慢性灌水打擊組均未發(fā)現(xiàn)TSAH。急性單純灌酒對照組1只出現(xiàn)自發(fā)性SAH。急性灌水組大鼠腦表面光澤，表面散在細(xì)小血管紋理。急性灌水打擊

6、組大鼠腦表面較蒼白，細(xì)小血管紋理細(xì)少或消失。急性單純灌酒組腦表面光澤，大片淤血，發(fā)生自發(fā)性SAH的腦干腹側(cè)薄層斑片狀蛛網(wǎng)膜下腔出血。急性灌酒打擊組大鼠TSAH 呈薄層斑片狀出血，主要分布在腦干腹側(cè)面，腦組織神經(jīng)元輕度水變性、細(xì)胞周隙略擴(kuò)大，偶見固縮深染的暗神經(jīng)元細(xì)胞、尼氏小體消失。慢性灌酒組大鼠腦表面光澤，大片淤血，可見散在暗神經(jīng)元細(xì)胞，呈暗紫紅色均質(zhì)化、胞體皺縮、胞漿及胞核濃縮，核不清或消失，軸突不規(guī)則扭曲，多見嗜神經(jīng)現(xiàn)象，神經(jīng)元數(shù)量

7、減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生。慢性灌酒打擊組大鼠發(fā)生TSAH 的腦表面大片較厚層蛛網(wǎng)膜下腔出血，主要分布在腦干腹側(cè)面，神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞中度水變性、細(xì)胞周隙明顯擴(kuò)大、尼氏小體消失。⑶急慢性灌水及灌水打擊對照組大鼠腦神經(jīng)元內(nèi)均有少量Ngb的表達(dá)。急慢性灌酒組和急慢性灌酒打擊組大鼠腦組織各區(qū)Ngb陽性細(xì)胞數(shù)，IOD值分別高于急慢性灌水組和急慢性灌水打擊組(P<0.01)。⑷急慢性灌水及灌水打擊對照組大鼠腦神經(jīng)元內(nèi)有散在少量細(xì)胞HIF-1α輕度表達(dá)。急慢

8、性灌酒組和急慢性灌酒打擊組大鼠腦組織各區(qū)HIF-1α陽性細(xì)胞數(shù)，IOD值分別高于急慢性灌水組和急慢性灌水打擊組(P<0.01)。⑸急慢性灌水及灌水打擊對照組大鼠腦神經(jīng)元內(nèi)有散在少量細(xì)胞Epo 表達(dá)。急慢性灌酒組和急慢性灌酒打擊組腦組織各區(qū)Epo 陽性細(xì)胞數(shù)，IOD 值分別高于急慢性灌水組和急慢性灌水打擊組(P<0.01)。急性灌酒打擊組Epo 陽性細(xì)胞數(shù)21.9±3.55 多于急性灌酒組20.0±3.00(P<0.01) 。慢性灌酒打擊

9、組的EpoIOD 值3821.6±336.21 也比慢性灌酒組3654.1±304.74 要高(P<0.01)。
　　 結(jié)論：①急慢性酒精中毒可促發(fā)TSAH，慢性酒精中毒與TSAH 高發(fā)生率及死亡率之間存在顯著相關(guān)性。提示酗酒后TSAH及其死亡案件的死因分析時，應(yīng)充分考慮酒精的急慢性毒理學(xué)效應(yīng)，其在TSAH死亡案件中與頭頸部外傷應(yīng)屬于協(xié)同死因。②慢性酒精中毒可通過抑制腦組織Ngb、HIF-1α、Epo等氧代謝通路相關(guān)因子表達(dá)，B