毛細(xì)支氣管炎和支氣管哮喘免疫學(xué)改變的比較.pdf

1、第一部分、毛細(xì)支氣管炎和支氣管哮喘外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群比較
　　 目的：比較毛細(xì)支氣管炎急性期和支氣管哮喘發(fā)作期外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞百分比及其細(xì)胞因子水平。
　　 方法：毛細(xì)支氣管炎急性期患兒31例，支氣管哮喘發(fā)作期26例及正常對(duì)照18例，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞占CD4細(xì)胞的比例。雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附

2、法(ELISA)檢測(cè)血清IL-4，IL-10，IL-17和IFN-γ水平。
　　 結(jié)果：毛細(xì)支氣管炎患兒Th1細(xì)胞亞群百分比較正常組和哮喘組均有降低，P值分別0.000和0.010；而支氣管哮喘組Th1百分比較正常組有降低趨勢(shì)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.096)。毛細(xì)支氣管炎組Th2細(xì)胞亞群百分比較正常組有升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.357)；與支氣管哮喘組相比降低(P=0.006)，同時(shí)哮喘組Th2細(xì)胞比例顯著高于正常組

3、(P=0.001)。毛細(xì)支氣管炎組Th17細(xì)胞亞群百分比較正常組有升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.336)；較支氣管哮喘組有降低趨勢(shì)偏低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.333)。毛細(xì)支氣管炎組。Treg細(xì)胞亞群百分比較正常組和喘息組，P值分別為0.024和0.000。進(jìn)一步做各組Th1/Th2細(xì)胞比值計(jì)算結(jié)果分別為：正常組：10.22±9.51，支氣管哮喘組：5.12±2.19，毛細(xì)支氣管炎組：5.52±1.16；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示毛細(xì)支氣管

4、炎組與支氣管哮喘組比較P=0.763，與正常組比較P=0.000。毛細(xì)支氣管炎患兒血清IFN-γ，比正常組降低(P=0.001)，與支氣管哮喘組比較偏高(P=0.023)。毛細(xì)支氣管炎組IL-4，較正常組升高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.893)，與支氣管哮喘組相比降低(P=0.000)。毛細(xì)支氣管炎組IL-17細(xì)胞亞群較正常組升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.451)；較支氣管哮喘組偏低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.363)。毛細(xì)支氣管炎組IL-1

5、0較正常組降低(P=0.002)；與支氣管哮喘組相比降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.023)。
　　 結(jié)論：毛細(xì)支氣管炎急性期與正常組比較Th1細(xì)胞亞群降低，Th2細(xì)胞亞群升高不明顯，Treg細(xì)胞亞群下降；哮喘發(fā)作期與正常組比較，Th1和Treg細(xì)胞亞群降低，Th2細(xì)胞亞群升高。Th1/Th2細(xì)胞比值提毛細(xì)支氣管炎急性期和哮喘發(fā)作期可能存在與相似的Th1和Th2細(xì)胞比值下降的失衡趨勢(shì)。同時(shí)毛細(xì)支氣管炎急性期Treg細(xì)胞百分比上調(diào)

6、，但可能存在功能不足。
　　 第二部分、毛細(xì)支氣管炎急性期外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞對(duì)毛細(xì)支氣管炎后喘息的影響
　　 目的：了解毛細(xì)支氣管炎后喘息與非喘息組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞計(jì)數(shù)及其細(xì)胞因子水平之間有無差異，以及過敏史、病毒感染類型對(duì)毛細(xì)支氣管炎后喘息的影響。
　　 方法：電話隨訪毛細(xì)支氣管炎患兒近一年的喘息情況。毛細(xì)支氣管炎后喘息患兒11例，非喘息患兒7例。采用流式細(xì)胞

7、術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例。ELISA檢測(cè)血清IL-4，IL-10，IL-17和IFN-γ水平。
　　 結(jié)果：毛細(xì)支氣管炎后喘息與非喘息患兒相比較，喘息組在毛細(xì)支氣管炎急性期Th17/CD4+T細(xì)胞和Th2細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞百分比有升高趨勢(shì)，Th1細(xì)胞百分比有降低趨勢(shì)，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而喘息組在毛細(xì)支氣管炎急性期Treg細(xì)胞百分比較非喘息組降低，差異有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義(P=0.023)。毛細(xì)支氣管炎后喘息患兒與非喘息患兒相比較，喘息組在毛細(xì)支氣管炎急性期血清IL-17、IL-4、IL-10、IFN-γ水平較非喘息組有升高趨勢(shì)，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：毛細(xì)支氣管炎后喘息的發(fā)生可能與毛細(xì)支氣管炎急性期Treg細(xì)胞功能障礙有關(guān)。
　　 第三部分、Mina基因多態(tài)性與兒童變應(yīng)性喘息相關(guān)性研究
　　 目的：研究Mina基因rs832081(C/T)，rs832078(C/

9、T)，rs4857304(G/T)，rs9879532(C/T)，rs17374916(A/G)，rs1532206(A/G)共6個(gè)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與重慶地區(qū)漢族兒童變應(yīng)性喘息的相關(guān)性。
　　 方法：采用病例對(duì)照研究，標(biāo)簽SNPs用Haploview version4.0軟件通過TAGGER程序計(jì)算。MALDI-TOF技術(shù)進(jìn)行Mina位點(diǎn)基因分型。觀察不同基因型和等位基因頻率在喘息組和對(duì)照組中的分布差異。
　

10、　 結(jié)果：共納入支氣管哮喘患兒202例年齡在6.97±2.85歲之間，對(duì)照組191例年齡在8.14±3.13歲之間。Mina的rs4857304位點(diǎn)在喘息組和對(duì)照組等位基因頻率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0199，OR=1.477，95％可信區(qū)間=1.062-2.052)，喘息組rs4857304位點(diǎn)等位基因T頻率高于對(duì)照組，而兩組之間該位點(diǎn)基因型分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：Mina基因rs48

11、57304位點(diǎn)與兒童變應(yīng)性喘息相關(guān)。
　　 第四部分、Mina基因rs4857304位點(diǎn)多態(tài)性不能判斷學(xué)齡前兒童反復(fù)喘息與支氣管哮喘
　　 目的：研究Mina基因rs4857304(G/T)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與5-7歲和7歲以上兒童變應(yīng)性喘息的相關(guān)性。
　　 方法：采用病例對(duì)照研究。MALDI-TOF技術(shù)進(jìn)行Mina位點(diǎn)基因分型。顯性遺傳模型用來比較rs4857304(G/T)位點(diǎn)GG型和TT+TG基因型之間的差

12、異。隱性遺傳模型用來比較rs4857304(G/T)位點(diǎn)TT型和TG+GG型之間基因型的差異。觀察Mina基因rs4857304位點(diǎn)TT型和TG+GG型在反復(fù)喘息和哮喘兒童之間差異。
　　 結(jié)果：共納入喘息患兒202例年齡在6.97±2.85歲之間，對(duì)照組191例年齡在8.14±3.13歲之間。通過隱性遺傳模型分析發(fā)現(xiàn)，rs4857304位點(diǎn)主要等位基因T純合型，即TT型和GG+GT型相比，在兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.028

13、2，OR=1.568，95％CI=1.048-2.346)。進(jìn)一步將喘息兒童分為反復(fù)喘息組和支氣管哮喘組，5-6歲反復(fù)喘息共有58例，其中TT型39例，GT+GG型19例。>7歲哮喘病人共有141例，其中TT型84例，GT+GG型57例。經(jīng)卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩組患兒之間的TT型和GT+GG型比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.353)。
　　 結(jié)論：Mina基因rs4857304位點(diǎn)多態(tài)性不能作為判斷學(xué)齡前兒童反復(fù)喘息和支氣管哮喘的標(biāo)準(zhǔn)之一。