檢測(cè)核酸的新型熒光探針研究.pdf

1、核酸是生物遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，與生物的生長(zhǎng)、發(fā)育等正常生命活動(dòng)以及癌變等異常生命活動(dòng)有關(guān)。檢測(cè)低含量核酸在生物工程、藥理學(xué)、臨床診斷中具有相當(dāng)重要的作用，其定量測(cè)定是詮釋核酸結(jié)構(gòu)和功能的基礎(chǔ)。目前測(cè)定核酸的分析方法很多，光譜分析法具有操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等特點(diǎn)，因此在很多情況下被廣泛使用。核酸本身的熒光很弱，直接運(yùn)用其熒光發(fā)射來(lái)研究它的結(jié)構(gòu)和生物活性受到限制，必須引入熒光探針。熒光分析法靈敏度高、選擇性好、操作方便，在生物分析中受到了人們的廣

2、泛關(guān)注和研究。 使用藥物、特別是天然藥物作為熒光探針來(lái)檢測(cè)核酸目前報(bào)道較少，本文選擇四環(huán)素、培氟沙星、大黃素和楊梅黃素四種不同類(lèi)型的藥物及其金屬配合物作為熒光探針，研究了它們與核酸作用的反應(yīng)條件，作用機(jī)理并將其應(yīng)用于核酸的測(cè)定。論文的主要內(nèi)容包括四個(gè)方面： 1. 根據(jù)核酸與大黃素—銅（II）配合物的相互作用，建立了一種檢測(cè)核酸的熒光分析方法。在pH = 5.6時(shí)，核酸與大黃素—銅（II）配合物的結(jié)合反應(yīng)在1 min內(nèi)完成

3、，并且在最大發(fā)射波長(zhǎng)434 nm處產(chǎn)生熒光猝滅。在最佳條件下，對(duì)ctDNA和yRNA的線(xiàn)性范圍分別是0.08—1.2 μg.mL-1和0.07—1.3 μg.mL-1。合成樣品的分析結(jié)果令人滿(mǎn)意，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2—4.6﹪。計(jì)算了金屬配合物大黃素—銅（II）與DNA的結(jié)合常數(shù)，并討論了其結(jié)合機(jī)理。 2. 利用熒光和紫外光譜法研究了鹽酸四環(huán)素(TC)-Zn(II)配合物與DNA的相互作用。研究結(jié)果表明TC與DNA無(wú)明顯相互作用

4、，但在Zn(II)離子作用下，TC能與小牛胸腺DNA結(jié)合。因此可以利用DNA與TC-Zn(II)相互作用使體系熒光強(qiáng)度增強(qiáng)的性質(zhì)進(jìn)行DNA的定量測(cè)定，其線(xiàn)性范圍為1.0×10-6～5.0×10-5 mol/L，檢出限為5.0×10-7 mol/L，用于實(shí)際樣品分析，結(jié)果令人滿(mǎn)意。并討論了反應(yīng)的最佳條件及其結(jié)合機(jī)理。 3. 利用熒光和紫外光譜法研究了培氟沙星(PEF)-Al3+配合物與DNA的相互作用。PEF能與Al3+生成PEF

5、-Al(Ⅲ)二元配合物，該配合物能與DNA發(fā)生相互作用。利用DNA與PEF-Al(III)作用能猝滅體系熒光強(qiáng)度的性質(zhì)來(lái)測(cè)定DNA，其線(xiàn)性范圍為8.0×10-6～2.25×10-4 mol/L，檢出限為5.0×10-6 mol/L。并討論了反應(yīng)的最佳條件及其結(jié)合機(jī)理。 4. 根據(jù)核酸能使楊梅黃素在436 nm處的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)的現(xiàn)象，建立了一種檢測(cè)核酸的方法。因?yàn)檎麄€(gè)操作只需混合兩種溶液，這是一種最簡(jiǎn)單的探針。在pH = 5.