檢測核酸的新型熒光探針研究.pdf

1、核酸是生物遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，與生物的生長、發(fā)育等正常生命活動以及癌變等異常生命活動有關(guān)。檢測低含量核酸在生物工程、藥理學(xué)、臨床診斷中具有相當(dāng)重要的作用，其定量測定是詮釋核酸結(jié)構(gòu)和功能的基礎(chǔ)。目前測定核酸的分析方法很多，光譜分析法具有操作簡便、重復(fù)性好等特點，因此在很多情況下被廣泛使用。核酸本身的熒光很弱，直接運用其熒光發(fā)射來研究它的結(jié)構(gòu)和生物活性受到限制，必須引入熒光探針。熒光分析法靈敏度高、選擇性好、操作方便，在生物分析中受到了人們的廣

2、泛關(guān)注和研究。 使用藥物、特別是天然藥物作為熒光探針來檢測核酸目前報道較少，本文選擇四環(huán)素、培氟沙星、大黃素和楊梅黃素四種不同類型的藥物及其金屬配合物作為熒光探針，研究了它們與核酸作用的反應(yīng)條件，作用機理并將其應(yīng)用于核酸的測定。論文的主要內(nèi)容包括四個方面： 1. 根據(jù)核酸與大黃素—銅（II）配合物的相互作用，建立了一種檢測核酸的熒光分析方法。在pH = 5.6時，核酸與大黃素—銅（II）配合物的結(jié)合反應(yīng)在1 min內(nèi)完成

3、，并且在最大發(fā)射波長434 nm處產(chǎn)生熒光猝滅。在最佳條件下，對ctDNA和yRNA的線性范圍分別是0.08—1.2 μg.mL-1和0.07—1.3 μg.mL-1。合成樣品的分析結(jié)果令人滿意，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2—4.6﹪。計算了金屬配合物大黃素—銅（II）與DNA的結(jié)合常數(shù)，并討論了其結(jié)合機理。 2. 利用熒光和紫外光譜法研究了鹽酸四環(huán)素(TC)-Zn(II)配合物與DNA的相互作用。研究結(jié)果表明TC與DNA無明顯相互作用

4、，但在Zn(II)離子作用下，TC能與小牛胸腺DNA結(jié)合。因此可以利用DNA與TC-Zn(II)相互作用使體系熒光強度增強的性質(zhì)進(jìn)行DNA的定量測定，其線性范圍為1.0×10-6～5.0×10-5 mol/L，檢出限為5.0×10-7 mol/L，用于實際樣品分析，結(jié)果令人滿意。并討論了反應(yīng)的最佳條件及其結(jié)合機理。 3. 利用熒光和紫外光譜法研究了培氟沙星(PEF)-Al3+配合物與DNA的相互作用。PEF能與Al3+生成PEF

5、-Al(Ⅲ)二元配合物，該配合物能與DNA發(fā)生相互作用。利用DNA與PEF-Al(III)作用能猝滅體系熒光強度的性質(zhì)來測定DNA，其線性范圍為8.0×10-6～2.25×10-4 mol/L，檢出限為5.0×10-6 mol/L。并討論了反應(yīng)的最佳條件及其結(jié)合機理。 4. 根據(jù)核酸能使楊梅黃素在436 nm處的熒光強度顯著增強的現(xiàn)象，建立了一種檢測核酸的方法。因為整個操作只需混合兩種溶液，這是一種最簡單的探針。在pH = 5.