新型單胺氧化酶熒光探針的研究.pdf

1、單胺氧化酶（MAO）是一種膜結(jié)合線粒體酶，在多巴胺氧化代謝中起重要作用。根據(jù)其對(duì)底物或抑制劑結(jié)合的特異性、細(xì)胞分布、免疫特異性等特性分為A和B兩種形式。它與人體的很多精神性疾病以及健康有著密切的關(guān)系，譬如帕金森癥、阿爾之海默癥、精神分裂癥和攻擊性行為及癌癥等。因此，MAO作為新藥物的靶標(biāo)越來越受到廣泛的關(guān)注和研究。目前有多種方法檢測(cè)單胺氧化酶的活性：分光光度法、放射性法、高效液相法以及熒光探針法等。分光光度法、放射性法、高效液相法等都不

2、適合高通量的篩選：而熒光探針具有很高的靈敏度和專一性，并且樣品不需要復(fù)雜的提純，因此熒光探針法被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和生物學(xué)。 本論文首先根據(jù)單胺氧化酶的反應(yīng)機(jī)理成功設(shè)計(jì)和合成了一個(gè)探針：4-甲基-7-（3-氨基丙基）-香豆素。該探針并無熒光，但經(jīng)與單胺氧化酶作用，3-氨基丙基轉(zhuǎn)化為醛，接著發(fā)生消除反應(yīng)后，生成了具有強(qiáng)烈熒光性能的4-甲基-7-羥基香豆素。因此通過檢測(cè)熒光的變化就可檢測(cè)MAO的活性。 接著利用從人胎盤和

3、牛肝中提取的MAOA和MAOB粗酶，系統(tǒng)的研究了探針的檢測(cè)條件：2 h，溫度為37℃，硼酸緩沖液pH=8.4，最后對(duì)他們的動(dòng)力學(xué)常數(shù)進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果為MAOA： Km=16.04±0.05μmol/L，Vmax=0.72±0.01 nmol/min/mg； MAOB： Km=12.25±0.05μmol/L，Vmax=2.57±0.02 nmol/min/mg。最后，本論文對(duì)探針進(jìn)行了簡(jiǎn)單的應(yīng)用，包括酶提取和人血清的檢測(cè)。 總