外寒傷肺的理論和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、寒邪是六淫之中常見(jiàn)的致病因素。寒邪由外而入者,稱之為外寒。外寒易傷肺致病,《黃帝內(nèi)經(jīng)》中有“形寒寒飲則傷肺”、“肺惡寒”等經(jīng)典理論。檢索國(guó)內(nèi)近20年的相關(guān)文獻(xiàn),關(guān)于寒證的研究較多,而從病因?qū)W的角度系統(tǒng)研究寒邪及其致病機(jī)理的較少,且研究不夠深入。本課題擬在中醫(yī)學(xué)病因病機(jī)理論的指導(dǎo)下,在對(duì)寒邪進(jìn)行理論回顧基礎(chǔ)上,模擬溫度、時(shí)間等作用因素,制作外寒傷肺的動(dòng)物模型,以肺臟作為研究的靶器官,觀察六淫寒邪對(duì)小鼠肺臟通調(diào)水道、衛(wèi)外等機(jī)能的影響,并通過(guò)

2、檢測(cè)肺部AQP-1、BAFF、NF-κB表達(dá)的改變,探討寒邪傷肺的可能分子機(jī)制,為六淫寒邪病因病機(jī)理論提供客觀的科學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),并為臨床辨證論治提供新的思路和量化檢測(cè)指標(biāo)。本課題具有理論創(chuàng)新和一定的臨床指導(dǎo)價(jià)值。
　　 1.理論研究
　　 寒是六氣之一,乃冬季之主氣,是大自然正常的氣候變化,正常的寒氣并不致病,若氣候變化異常,寒氣過(guò)重,傷人正氣,致人疾病,這種“不正之寒氣”中醫(yī)學(xué)上稱之為寒邪(淫),寒邪并不僅僅是一個(gè)單純的

3、異常氣候因素,應(yīng)該還包括物理、化學(xué)因素、氣象因素、生物致病因子等,且與機(jī)體的體質(zhì)、反應(yīng)性甚或某些基因的表達(dá)密切相關(guān)。
　　 肺位于胸腔,左右各一,為臟腑之華蓋,百脈之朝會(huì),主氣司呼吸,具有宣發(fā)肅降之生理特性。通過(guò)宣發(fā)肅降,通調(diào)水道,對(duì)體內(nèi)水液的輸布、運(yùn)行和排泄起著疏通和調(diào)節(jié)作用;通過(guò)宣發(fā)衛(wèi)氣于體表,實(shí)現(xiàn)衛(wèi)外御邪的功能。
　　 《黃帝內(nèi)經(jīng)》記載有:“肺惡寒”、“形寒寒飲則傷肺”、“重寒傷肺”,肺惡寒與肺的生理特性密切相關(guān)。

4、肺臟通過(guò)鼻竅與外界直接相通,且肺臟清虛嬌嫩,在中醫(yī)學(xué)上被稱之為“嬌臟”,不耐寒襲,肺臟主身之皮毛,皮毛受寒,亦可內(nèi)合于肺。
　　 外寒傷肺的基本病機(jī)為肺陽(yáng)受損。肺陽(yáng)是肺氣中具有溫煦、推動(dòng)、宣發(fā)等作用的部分。寒為陰邪,易傷陽(yáng)氣。寒邪客于肺,可使肺陽(yáng)受損,肺失宣降,肺行水功能障礙,肺內(nèi)水液停驟為飲;衛(wèi)氣不能輸布于體表,衛(wèi)外功能障礙,導(dǎo)致衛(wèi)外不固。
　　 2.實(shí)驗(yàn)研究
　　 2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
　　 SPF級(jí)

5、昆明種小鼠50只,體重17±1g,雌雄各半。常規(guī)飼養(yǎng)7天后隨機(jī)分為7組:①常溫對(duì)照組,②4℃7天組,③4℃14天組,④0℃7天組,⑤0℃14天組,⑥0℃7天藥物治療組,⑦4℃7天藥物治療組。
　　 2.2實(shí)驗(yàn)藥物
　　 甘草干姜湯加麻黃,組成:甘草30g、干姜30g、麻黃20g。將上述三種中藥混合經(jīng)水煎煮、過(guò)濾、濃縮,配制成每毫升含生藥0.2g的水煎劑,裝瓶后置于4℃冰箱密閉保存?zhèn)溆?br>　　 2.3指標(biāo)檢測(cè)

6、　　 2.3.1一般情況觀察
　　 觀察小鼠的神態(tài)、活動(dòng)量、口唇耳色澤,皮毛情況以及食量、體重的改變情況。
　　 2.3.2小鼠肺組織結(jié)構(gòu)觀察
　　 采用蘇木素伊紅(眥)染色法,光鏡觀察。
　　 2.3.3肺濕干重比值(W/D)計(jì)算
　　 W/D=肺濕重/烘干后重量。
　　 2.3.4肺組織AQP-1表達(dá)的測(cè)定
　　 采用Western blot法檢測(cè)。
　　 2.3.5

7、血清IgG和呼吸道液IgG的檢測(cè)
　　 采用ELISA試劑盒檢測(cè)。
　　 2.3.6肺組織BAFF表達(dá)的檢測(cè)
　　 采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)。
　　 2.3.7肺組織NF-κB表達(dá)的檢測(cè)
　　 采用Western blot法檢測(cè)。
　　 2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 數(shù)據(jù)采用-X±S表示,以SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用采用方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P＜0.05為差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.結(jié)果
　　 4℃7天組、4℃14天組,0℃7天組、0℃14天組小鼠造模期間口唇、耳朵、尾巴顏色逐漸變蒼白,活動(dòng)量減少,體重增幅減小,部分小鼠體重逐漸減輕,消瘦明顯,食量減少。肺組織病理切片顯示4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織水腫充血,肺泡腔內(nèi)有大量水液潴留,并可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以上結(jié)果符合寒邪傷肺的證候?qū)W特點(diǎn),且肺部病變明顯,說(shuō)明成功復(fù)制了外寒傷肺動(dòng)物模型。
　　 稱量小鼠肺臟的干濕重量

9、,發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比,4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織濕干重比值升高(P＜0.05)。采用Western blot法檢測(cè)肺組織AQP-1,發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比,4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織AQP-1的表達(dá)水平下降,提示外寒可能通過(guò)下調(diào)AQP-1的表達(dá)影響肺的通調(diào)水道功能。
　　 ELISA法檢測(cè)外寒小鼠IgG-S和IgG-R的濃度發(fā)現(xiàn),與正常組相比,4℃7天組、4℃14天組,0℃7天組、0℃14天組小鼠IgG-S和IgG-