舒張性心力衰竭的發(fā)病機制及藥物干預研究.pdf

1、第一部分：兔舒張性和收縮性心衰模型的建立及心室重構(gòu)的比較
　　 [研究目的]分
　　 別建立兔舒張性心衰和收縮性心衰的模型，并比較它們之間心功能和心室重構(gòu)的差異。
　　 [研究方法]
　　 新西蘭白兔隨機分為3組：假手術(shù)組、收縮性心衰組和舒張性心衰組(每組8只)，采用腹主動脈縮窄術(shù)建立舒張性心衰模型，用主動脈瓣破瓣術(shù)建立收縮性心衰模型；使用心臟彩超和血流動力學檢測心功能，用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中B型腦鈉

2、肽、腎上腺素和去甲腎上腺素的含量；用HE染色和VG染色觀察各組心肌組織的病理情況，用天狼猩紅染色測定膠原面積(CA)、容積分數(shù)(CVF)及Ⅰ/Ⅲ型膠原的面積比值，用羥脯氨酸法測定心肌膠原含量(CC)。
　　 [研究結(jié)果]
　　 術(shù)后12周，與假手術(shù)組相比，舒張性心衰組左室壁明顯增厚，心肌僵硬度增大，E/A比值明顯增大，等容舒張期時間明顯延長，心室舒張末壓明顯增大而射血分數(shù)正常，間質(zhì)膠原含量、面積、容積分數(shù)及Ⅰ/Ⅲ型面積比

3、值均顯著升高(P均<0.01)；收縮性心衰組左心室腔明顯擴大，心室射血分數(shù)降低，心室舒張末壓明顯增大，間質(zhì)膠原含量、面積及容積分數(shù)明顯升高，但Ⅰ/Ⅲ型膠原面積比值下降(P<0.05或P<0.01)。此外，兩心衰組的左房內(nèi)徑及血清中的B型腦鈉肽、腎上腺素和去甲腎上腺素的含量均較假手術(shù)組顯著升高(P<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 成功構(gòu)建了兔舒張性心衰和收縮性心衰模型，收縮性心衰模型表現(xiàn)為左室腔明顯擴大，室壁未見增厚；

4、而舒張性心衰模型左室壁明顯增厚，心腔未見擴大，且心肌間質(zhì)重構(gòu)較前者更為顯著。
　　 第二部分：兔舒張性和收縮性心衰模型之間鈣滲漏特點的比較
　　 [研究目的]比較兔舒張性心衰和收縮性心衰模型之間鈣滲漏特點以及相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白表達和活性的差異并探討其可能的機制。
　　 [研究方法]
　　 用鈣離子熒光成像儀進行肌漿網(wǎng)鈣滲漏的檢測，采用分子生物學技術(shù)(RT-PCR和Western blot)檢測各組心肌組織中FK

5、506結(jié)合蛋白12.6(FKBP12.6)、Ca2+/鈣調(diào)素依賴的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶A(PKA)、蘭尼堿受體(RyR2)及其磷酸化位點表達和磷酸化狀態(tài)，利用γ-32P底物摻入法測定CaMKⅡ、PKA的活性。
　　 [研究結(jié)果]
　　 與假手術(shù)組相比，在舒張性心衰組中沒有檢測到明顯的肌漿網(wǎng)鈣滲漏，F(xiàn)KBP12.6在心肌中的表達總量顯著下降(P<0.05)，PKA的表達和活性均明顯升高(P<0.05或P<0.

6、01)，以及該酶在RyR2的磷酸化位點(RyR2-P2809)的磷酸化狀態(tài)也顯著增高(P<0.05)，而CaMKⅡ的表達和活性及其在RyR2的磷酸化位點(RyR2-P2815)的磷酸化狀態(tài)則無明顯改變；在收縮性心衰組中檢測出異常增高的鈣滲漏(P<0.01)，F(xiàn)KBP12.6在心肌中的總表達量及其與RyR2的結(jié)合量均顯著下降(P<0.05)，PKA和CaMKⅡ的表達和活性及其它們在RyR2的磷酸化位點的磷酸化狀態(tài)均顯著升高(P<0.05或

7、P<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 在收縮性心衰模型中發(fā)現(xiàn)了異常增高的鈣滲漏，而在舒張性心衰模型中并未檢測到類似的現(xiàn)象，這可能是舒張性心衰保留有正常的心室收縮功能的原因之一，CaMKⅡ在肌漿網(wǎng)鈣滲漏中可能起著更為關(guān)鍵的作用。
　　 第三部分：兔舒張性和收縮性心衰模型之間鈣回攝功能的比較
　　 [研究目的]比較兔舒張性心衰和收縮性心衰模型之間鈣回攝功能及其鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達和活性的差異并探討其可能的機

8、制。
　　 [研究方法]
　　 用鈣離子熒光成像儀進行肌漿網(wǎng)鈣回攝功能的檢測，采用分子生物學技術(shù)(RT-PCR和Western blot)檢測各組心肌組織中肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2a)、受磷蛋白(PLB)、Ca2+/鈣調(diào)素依賴的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白磷脂酶(PP1α)等蛋白的表達，利用γ-32P底物摻入法測定CaMKⅡ、PKA的活性。
　　 [研究結(jié)果]
　　 與假手術(shù)組相比

9、，舒張性心衰組和收縮性心衰組中鈣回攝量均顯著下降(P<0.01)，SERCA2a在心肌中的表達量和活性也均顯著下降(P<0.05)，且PKA的表達和活性均明顯升高(P<0.05或P<0.01)，PP1α的表達量也顯著升高(P<0.05)。在舒張性心衰組中NCX、PLB及其磷酸化位點(Ser-16)的表達水平和磷酸化狀態(tài)無明顯改變；而在收縮性心衰組中PLB及其磷酸化位點(Ser-16)的表達水平和磷酸化狀態(tài)也明顯降低(P<0.05)，但N

10、CX的蛋白表達水平卻明顯升高(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 舒張性心衰和收縮性心衰模型中肌漿網(wǎng)鈣回攝功能、SERCA2a的表達和活性均顯著下降，收縮性心衰模型中NCX的表達明顯升高；舒張性心衰模型中NCX的表達無明顯改變，這可能是兩種心衰發(fā)病機制不同的原因之一。
　　 第四部分：阿托伐他汀對兔舒張性心衰模型心室重構(gòu)及鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達的影響
　　 [研究目的]
　　 研究阿托伐他汀對舒張

11、性心衰心室重構(gòu)及鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達的影響。
　　 [研究方法]
　　 新西蘭白兔隨機分為3組：假手術(shù)組、舒張性心衰組和阿托伐他汀組(每組8只)，采用腹主動脈縮窄術(shù)建立舒張性心衰模型，阿托伐他汀組腹主動脈縮窄術(shù)后24h給予阿托伐他汀5mg.kg-1.d-1，通過心臟超聲和血流動力學檢查比較三者心功能的差異，通過HE染色和VG染色觀察各組心肌組織的病理情況的差異，通過心肌膠原含量(CC)測定(羥脯氨酸法)和天狼猩紅染色(PS

12、R)測定膠原面積(CA)、容積分數(shù)(CVF)及Ⅰ/Ⅲ型膠原的面積比值比較三者間質(zhì)重構(gòu)的差異。通過Western blot比較各組心肌組織中肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2a)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白磷脂酶(PP1α)表達的差異。
　　 [研究結(jié)果]
　　 術(shù)后12周，與假手術(shù)組相比，舒張性心衰組心超檢查發(fā)現(xiàn)室間隔和左室后壁明顯增厚，左房內(nèi)徑明顯擴大，E/A比值明顯升高、等容舒張期時間顯著延長(P均<0.01)，而射血分數(shù)正常

13、；血流動力學左室舒張末壓力明顯升高，左室松弛時間常數(shù)(tau)也顯著延長(P<0.01)；間質(zhì)膠原含量、總面積、容積分數(shù)及Ⅰ/Ⅲ型面積比值均顯著升高(P<0.01)，心肌組織中SERCA2a蛋白表達明顯下降，PKA和PP1α蛋白表達則明顯升高(P<0.05)。阿托伐他汀組的室間隔、左室后壁、間質(zhì)膠原含量、總面積和容積分數(shù)均明顯低于舒張性心衰組，但略高于假手術(shù)組(P<0.05或P<0.01)，而上述其余指標與假手術(shù)組比無明顯改變。

14、　　 [結(jié)論]：
　　 阿托伐他汀可以顯著改善壓力負荷導致的心室重構(gòu)并能調(diào)節(jié)其鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達，從而延緩整個病理過程發(fā)展到舒張性心衰。
　　 第五部分：替米沙坦對兔舒張性心衰模型心室重構(gòu)及鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達的影響
　　 [研究目的]
　　 研究替米沙坦對舒張性心衰心室重構(gòu)及鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達的影響。
　　 [研究方法]
　　 新西蘭白兔隨機分為3組：假手術(shù)組、舒張性心衰組和替米沙坦組

15、(每組8只)，舒張性心衰模型采用腹主動脈縮窄術(shù)，替米沙坦組腹主動脈縮窄術(shù)后給予替米沙坦10mg.kg-1.d-1，通過心臟超聲和血流動力學檢查比較三者心功能的差異，通過HE染色和VG染色觀察各組心肌組織的病理情況的差異，通過心肌膠原含量(CC)測定(羥脯氨酸法)和天狼猩紅染色測定膠原面積(CA)、容積分數(shù)(CVF)及Ⅰ/Ⅲ型膠原的面積比值比較三者間質(zhì)重構(gòu)的差異。通過Western blot比較各組心肌組織中SERCA2a、PKA和PP1

16、α表達的差異。
　　 [研究結(jié)果]
　　 術(shù)后12周，與假手術(shù)組相比，舒張性心衰組心超檢查發(fā)現(xiàn)室間隔和左室后壁明顯增厚，左房內(nèi)徑明顯擴大，E/A比值明顯升高、等容舒張期時間顯著延長(P均<0.01)，而射血分數(shù)正常；血流動力學左室舒張末壓力明顯升高，左室松弛時間常數(shù)(tau)也顯著延長(P<0.01)；間質(zhì)膠原含量、總面積、容積分數(shù)及Ⅰ/Ⅲ型面積比值均顯著升高(P<0.01)，心肌組織中SERCA2a蛋白表達明顯下降，P