健胃愈瘍顆粒抗消化性潰瘍復發(fā)的作用及與胃黏膜疏水性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 本課題通過實驗研究和臨床研究，觀察健胃愈瘍顆粒(Jianweiyuyang granules，JWYY)對消化性潰瘍(Peptic ulcer，PU)愈合過程中PAF、PS2的表達以及對氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角(Contact angle，CA)的影響，從胃粘膜表面疏水性的角度探討JWYY治療PU及及抗?jié)儚桶l(fā)的機制。 方法： 1.實驗研究： 將108只大鼠隨機分為5組，即正常對照組

2、(12只)、假手術(shù)組(12只)、模型組(36只)、J唧組(24只)，雷尼替丁組(簡稱Rani組)(24只)、。采用改良Okabe乙酸涂抹法復制實驗性胃潰瘍模型，正常對照組不造模，假手術(shù)對照組以生理鹽水代替乙酸，造模后24h，JWYY組、Rani組分別灌以JWYY和雷尼替丁藥液，量分別為1.62g/(kg.d)、27mg/(kg.d)體重，其余各組灌服蒸餾水，量均為1ml/100g體重，每天1次。造模第90d，再將模型組大鼠隨機分為模型組

3、和模型復發(fā)組，腹腔注射白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)(1μg/kg體重)復制胃潰瘍復發(fā)模型，模型組以生理鹽水代替IL-1β。分別于造模第7d、92d(即復發(fā)潰瘍誘導后48h)均分2批處死各組大鼠，剖腹取胃，沿潰瘍周圍切下約1×1cm2大小的胃組織，刮取胃粘液低溫冷凍保存以后作磷脂和氨基己糖測定，然后將胃組織標本一分為三：一部分將其迅速放入液氮瓶中備用，用于RT-PCR和Western blotting檢測胃

4、潰瘍復發(fā)大鼠PAF、PS2表達的變化；一部分迅速浸入4％多聚甲醛(PH7.4)中固定16h，然后常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色，免疫組化檢測胃潰瘍復發(fā)大鼠PAF、PS2表達的變化；最后一部分作胃粘膜表面的接觸角的測定，觀察JWYY對氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角的影響。 2.臨床研究： 選取經(jīng)胃鏡證實的消化性潰瘍(Peptic Uleer，PU)患者(中醫(yī)辨證屬肝郁脾虛證者)72例，其中經(jīng)胃鏡和組織學及尿素酶

5、檢查證實幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)陽性的PU且中醫(yī)辨證屬肝郁脾虛型的患者50例JWYY治療組和雷尼替丁(Ranitidine，Rani)對照組各36例。以上病例均符合《內(nèi)科學》第5版PU的診斷標準。治療方法：治療組給予JWYY，每次9 g口服，3次/d。對照組給予Rani，每次0.15g口服，2次/d，Hp陽性者加用阿莫西林膠囊和甲硝唑。兩組均以4周為1個療程。臨床觀察主要觀察治療后胃鏡療效、Hp根除率、

6、證候療效、1年復發(fā)率。兩組PU患者均胃鏡下取潰瘍邊緣活檢標本4-5塊，一塊做Hp試驗；一塊多聚甲醛固定后石蠟切片以備免疫組織化學檢查檢測PAF、PS2表達的變化；一塊刮取胃黏液測氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角；一至兩塊置液氮罐中，爾后-70℃保存以備做免疫熒光法和Western blotting用檢測PAF、PS2表達的變化。另在取得患者知情同意后，胃鏡下取12個無粘膜病變患者的胃粘膜標本4-5塊作為空白對照組，即正常組。正常組

7、不作治療和復查，只取一次標本行上述檢查。一個療程后PU患者再按照前面的方法取胃粘膜活檢標本。 結(jié)果： 1.實驗研究： 胃潰瘍造模7d后，除正常組和假手術(shù)組，其余各組大鼠胃相應乙酸造模部位肉眼觀察和組織學檢查均可見到潰瘍病灶，但潰瘍程度不一，模型組GUI最高，JWYY組、Rani組GUI均顯著低于模型組(P<0.01)。JWYY組愈合潰瘍組織形態(tài)學表現(xiàn)優(yōu)于Rani組(P<0.01)。92d，JWYY組、模型復發(fā)組、

8、Rani組復發(fā)率分別為75％、16.7％、58.3％，后二者與前者比較有顯著性差異均(P<0.01)。JWYY組比Rani組所見再生黏膜更厚，修復更完全。JWYY組比Rani組更能明顯降低潰瘍復發(fā)率和潰瘍指數(shù)(P<0.01.)。造模92d時，JWYY組的UI和潰瘍復發(fā)率明顯低于其他各組(P<0.01)。JWYY組氨基己糖，磷脂含量和CA增高，與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。免疫組化及RT-PCR，Western blotti

9、ng檢測顯示：大鼠氨基己糖，磷脂含量和CA與PAF、PS2的表達有直線相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，JWYY顆粒能提高PS2和下調(diào)PAF的表達，影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響胃黏膜的疏水性，這可能是其促進潰瘍愈合的機制之一。 2.臨床研究： 我們通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，JWYY治療組和Rani對照組均能有效治療PU，兩者潰瘍內(nèi)鏡愈合率相當(P>0.05)，但治療組較對照組更能改善患者臨床癥狀，且1年復發(fā)率降低(P<0

10、.05)，治療組1年復發(fā)率為4.1％，對照組為30％，兩組比較有顯著性差異(P<0.01)。而且光學顯微鏡觀察也發(fā)現(xiàn)，PU患者經(jīng)JWYY治療后比治療前，黏膜厚度增加，修復更完全潰瘍床及潰瘍周圍炎癥細胞浸潤少，纖維排列較整齊，與與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。 JWYY組氨基己糖，磷脂含量和CA增高，與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。免疫組化及RT-PCR，Western blotting檢測顯示：PU患者

11、氨基己糖，磷脂含量和CA和PAF、PS2的表達有直線相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，JWYY顆粒能提高PS2和下調(diào)PAF的表達，影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響胃黏膜的疏水性，這可能是其促進潰瘍愈合的機制之一。 結(jié)論： 1.從動物實驗到臨床觀察，均證明JWYY能促進消化性潰瘍愈合，并有明顯的抗?jié)儚桶l(fā)的作用。 2.JWYY顆粒通過提高PS2和下調(diào)PAF的表達，通過影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響