健胃愈瘍顆?？瓜詽儚?fù)發(fā)的作用及與胃黏膜疏水性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 本課題通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究，觀察健胃愈瘍顆粒(Jianweiyuyang granules，JWYY)對(duì)消化性潰瘍(Peptic ulcer，PU)愈合過(guò)程中PAF、PS2的表達(dá)以及對(duì)氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角(Contact angle，CA)的影響，從胃粘膜表面疏水性的角度探討JWYY治療PU及及抗?jié)儚?fù)發(fā)的機(jī)制。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)研究： 將108只大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組

2、(12只)、假手術(shù)組(12只)、模型組(36只)、J唧組(24只)，雷尼替丁組(簡(jiǎn)稱(chēng)Rani組)(24只)、。采用改良Okabe乙酸涂抹法復(fù)制實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型，正常對(duì)照組不造模，假手術(shù)對(duì)照組以生理鹽水代替乙酸，造模后24h，JWYY組、Rani組分別灌以JWYY和雷尼替丁藥液，量分別為1.62g/(kg.d)、27mg/(kg.d)體重，其余各組灌服蒸餾水，量均為1ml/100g體重，每天1次。造模第90d，再將模型組大鼠隨機(jī)分為模型組

3、和模型復(fù)發(fā)組，腹腔注射白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)(1μg/kg體重)復(fù)制胃潰瘍復(fù)發(fā)模型，模型組以生理鹽水代替IL-1β。分別于造模第7d、92d(即復(fù)發(fā)潰瘍誘導(dǎo)后48h)均分2批處死各組大鼠，剖腹取胃，沿潰瘍周?chē)邢录s1×1cm2大小的胃組織，刮取胃粘液低溫冷凍保存以后作磷脂和氨基己糖測(cè)定，然后將胃組織標(biāo)本一分為三：一部分將其迅速放入液氮瓶中備用，用于RT-PCR和Western blotting檢測(cè)胃

4、潰瘍復(fù)發(fā)大鼠PAF、PS2表達(dá)的變化；一部分迅速浸入4％多聚甲醛(PH7.4)中固定16h，然后常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色，免疫組化檢測(cè)胃潰瘍復(fù)發(fā)大鼠PAF、PS2表達(dá)的變化；最后一部分作胃粘膜表面的接觸角的測(cè)定，觀察JWYY對(duì)氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角的影響。 2.臨床研究： 選取經(jīng)胃鏡證實(shí)的消化性潰瘍(Peptic Uleer，PU)患者(中醫(yī)辨證屬肝郁脾虛證者)72例，其中經(jīng)胃鏡和組織學(xué)及尿素酶

5、檢查證實(shí)幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)陽(yáng)性的PU且中醫(yī)辨證屬肝郁脾虛型的患者50例JWYY治療組和雷尼替丁(Ranitidine，Rani)對(duì)照組各36例。以上病例均符合《內(nèi)科學(xué)》第5版PU的診斷標(biāo)準(zhǔn)。治療方法：治療組給予JWYY，每次9 g口服，3次/d。對(duì)照組給予Rani，每次0.15g口服，2次/d，Hp陽(yáng)性者加用阿莫西林膠囊和甲硝唑。兩組均以4周為1個(gè)療程。臨床觀察主要觀察治療后胃鏡療效、Hp根除率、

6、證候療效、1年復(fù)發(fā)率。兩組PU患者均胃鏡下取潰瘍邊緣活檢標(biāo)本4-5塊，一塊做Hp試驗(yàn)；一塊多聚甲醛固定后石蠟切片以備免疫組織化學(xué)檢查檢測(cè)PAF、PS2表達(dá)的變化；一塊刮取胃黏液測(cè)氨基己糖、磷脂含量和胃粘膜表面的接觸角；一至兩塊置液氮罐中，爾后-70℃保存以備做免疫熒光法和Western blotting用檢測(cè)PAF、PS2表達(dá)的變化。另在取得患者知情同意后，胃鏡下取12個(gè)無(wú)粘膜病變患者的胃粘膜標(biāo)本4-5塊作為空白對(duì)照組，即正常組。正常組

7、不作治療和復(fù)查，只取一次標(biāo)本行上述檢查。一個(gè)療程后PU患者再按照前面的方法取胃粘膜活檢標(biāo)本。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)研究： 胃潰瘍?cè)炷?d后，除正常組和假手術(shù)組，其余各組大鼠胃相應(yīng)乙酸造模部位肉眼觀察和組織學(xué)檢查均可見(jiàn)到潰瘍病灶，但潰瘍程度不一，模型組GUI最高，JWYY組、Rani組GUI均顯著低于模型組(P<0.01)。JWYY組愈合潰瘍組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)優(yōu)于Rani組(P<0.01)。92d，JWYY組、模型復(fù)發(fā)組、

8、Rani組復(fù)發(fā)率分別為75％、16.7％、58.3％，后二者與前者比較有顯著性差異均(P<0.01)。JWYY組比Rani組所見(jiàn)再生黏膜更厚，修復(fù)更完全。JWYY組比Rani組更能明顯降低潰瘍復(fù)發(fā)率和潰瘍指數(shù)(P<0.01.)。造模92d時(shí)，JWYY組的UI和潰瘍復(fù)發(fā)率明顯低于其他各組(P<0.01)。JWYY組氨基己糖，磷脂含量和CA增高，與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。免疫組化及RT-PCR，Western blotti

9、ng檢測(cè)顯示：大鼠氨基己糖，磷脂含量和CA與PAF、PS2的表達(dá)有直線相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，JWYY顆粒能提高PS2和下調(diào)PAF的表達(dá)，影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響胃黏膜的疏水性，這可能是其促進(jìn)潰瘍愈合的機(jī)制之一。 2.臨床研究： 我們通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn)，JWYY治療組和Rani對(duì)照組均能有效治療PU，兩者潰瘍內(nèi)鏡愈合率相當(dāng)(P>0.05)，但治療組較對(duì)照組更能改善患者臨床癥狀，且1年復(fù)發(fā)率降低(P<0

10、.05)，治療組1年復(fù)發(fā)率為4.1％，對(duì)照組為30％，兩組比較有顯著性差異(P<0.01)。而且光學(xué)顯微鏡觀察也發(fā)現(xiàn)，PU患者經(jīng)JWYY治療后比治療前，黏膜厚度增加，修復(fù)更完全潰瘍床及潰瘍周?chē)装Y細(xì)胞浸潤(rùn)少，纖維排列較整齊，與與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。 JWYY組氨基己糖，磷脂含量和CA增高，與雷尼替丁組比差異有顯著性(P<0.01)。免疫組化及RT-PCR，Western blotting檢測(cè)顯示：PU患者

11、氨基己糖，磷脂含量和CA和PAF、PS2的表達(dá)有直線相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，JWYY顆粒能提高PS2和下調(diào)PAF的表達(dá)，影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響胃黏膜的疏水性，這可能是其促進(jìn)潰瘍愈合的機(jī)制之一。 結(jié)論： 1.從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)到臨床觀察，均證明JWYY能促進(jìn)消化性潰瘍愈合，并有明顯的抗?jié)儚?fù)發(fā)的作用。 2.JWYY顆粒通過(guò)提高PS2和下調(diào)PAF的表達(dá)，通過(guò)影響胃黏膜氨基己糖及磷脂含量和CA，從而影響