人參皂苷Rg1對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝衰竭模型作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：急性肝衰竭病情危重、病死率極高，目前仍是臨床危重癥，除了人工肝替代治療、肝移植外，尚缺乏臨床治療特效藥物，因此探究臨床治療藥物非常必要。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1(G-Rg1)對(duì)小鼠急性肝衰竭模型具有預(yù)防效果,且其可能與抗肝細(xì)胞凋亡和抗炎作用有關(guān)，但G-Rg1的具體作用機(jī)制、靶點(diǎn)仍不清楚，需要進(jìn)一步研究。因此擬建立四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠模型，進(jìn)一步研究G-Rg1對(duì)急性肝衰竭模型的作用機(jī)制，驗(yàn)證G-Rg1對(duì)A

2、LF小鼠模型的有效性，初步探討G-Rg1對(duì)CCl4誘導(dǎo)的ALF小鼠模型抗肝細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：采用隨機(jī)數(shù)字法將40只健康成年C57/BL雄性小鼠分為生理鹽水對(duì)照(NS)組，G-Rg1空白對(duì)照(G-Rg1)組，CCl4模型(CCl4)組，G-Rg1預(yù)防治療(CCl4+G-Rg1)組。建模12h后采集各組小鼠血清和肝臟組織，用試劑盒法檢測(cè)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)

3、氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、總膽紅素(total bilirubin，Tbil)水平；HE染色評(píng)價(jià)肝臟組織病理學(xué)改變；定量 PCR法檢測(cè)肝臟葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、C/EBP家族同源蛋白(CHOP)的表達(dá)量；Western blot檢測(cè) GRP78、CHOP、半胱氨酸蛋白酶12(caspase12)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)的表達(dá)情況；免疫組織化學(xué)法分析GRP78、casp

4、ase3的表達(dá)情況；TUNEL法檢測(cè)C57/BL小鼠肝臟組織細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：⑴CCl4+G-Rg1組血清ALT、AST、TBil水平低于CCl4組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。NS組、G-Rg1組、CCl4組、CCl4+G-Rg1組ALT值分別為（50.12±9.25）U/L、（40.48±6.38）U/L、（980.66±110.29） U/L、（691.30±108.06）U/L；AST值分別為（9.69±2

5、.78）U/L、（9.40±3.84） U/L、（319.44±89.32） U/L、（195.40±15.41） U/L；TBil值分別為（0.46±0.13）mg/dL、（0.48±0.08）mg/dL、（1.56±0.12）mg/dL、（1.09±0.11）mg/dL。⑵模型構(gòu)建完成后 HE染色示 CCl4組肝臟出現(xiàn)明顯變性壞死并可見肝細(xì)胞壞死灶，呈典型的CCl4所致肝細(xì)胞病理表現(xiàn)。經(jīng)G-Rg1預(yù)防治療后的CCl4+G-Rg1組肝

6、臟組織變性壞死程度較CCl4組明顯減輕。⑶CCl4+G-Rg1組GRP78、CHOP的mRNA相對(duì)表達(dá)量均較CCl4組下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=34.4、F=44.1，P＜0.05)。⑷Western bolt結(jié)果顯示CCl4+G-Rg1組與CCl4組相比，caspase3、GRP78、caspase12、CHOP蛋白相對(duì)表達(dá)量均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=270.58、F=34.73、F=92.38、F=31.63，P

7、＜0.05)。⑸免疫組織化學(xué)法檢測(cè)GRP78、caspase3表達(dá)情況，光鏡下觀察結(jié)果顯示CCl4組較NS組胞漿內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多。CCl4+G-Rg1組較CCl4組胞漿內(nèi)棕色顆粒減少。⑹TUNEL結(jié)果顯示CCl4+G-Rg1組棕色顆粒物質(zhì)較CCl4組明顯減少(F=330.9，P＜0.05)，提示G-Rg1預(yù)防治療可以減輕CCl4引起的肝細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：G-Rg1預(yù)防用藥可抑制CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝衰竭的炎癥反應(yīng)，同時(shí)可