鴨疫里氏桿菌DPPⅣ缺失株的生物學(xué)特性研究和aroA缺失株的構(gòu)建.pdf

1、鴨疫里氏桿菌病是由鴨疫里氏桿菌（Riemerella anatipestifer，RA）引起的目前嚴(yán)重危害養(yǎng)鴨業(yè)的重要接觸性傳染病之一，特征是敗血性滲出，臨床剖檢癥狀主要表現(xiàn)為全身漿膜炎性滲出。該病呈世界范圍分布，給世界各國的養(yǎng)鴨業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。目前把RA分為21個血清型，因為血清型眾多，而各個血清型之間缺乏有效的交叉保護(hù)，使用疫苗免疫預(yù)防該病困難重重，一旦感染此病，將給鴨場帶來難以估量的損失，因此我們迫切需要安全有效的疫苗來防

2、治此病。使用分子生物學(xué)手段，研究鴨疫里氏桿菌的致病和免疫機(jī)制，對預(yù)防該病具有重大意義。
　　 本研究以血清1型鴨疫里氏桿菌云夢株（RA-YM）為親本株，通過構(gòu)建重組自殺性質(zhì)粒，采用結(jié)合轉(zhuǎn)移方法構(gòu)建了RA-YM株的aroA基因缺失株，為后續(xù)研究鴨疫里氏桿菌aroA基因的功能奠定基礎(chǔ)。同時，對本實驗室已構(gòu)建的鴨疫里氏桿菌DPPⅣ缺失株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　 1鴨疫里氏桿菌DPPⅣ缺失株的生物學(xué)

3、特性研究
　　 經(jīng)生化鑒定，鴨疫里氏桿菌DPPⅣ缺失株和親本株的生化特性并無變化。將鴨疫里氏桿菌DPPⅣ缺失株和親本株在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，測定其生長曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺失株的生長速度比親本株慢。
　　 對8日齡雛鴨攻毒，鴨疫里氏桿菌缺失株的LD50為1.0×108CFU，親本株的LD50為3.6×106CFU，缺失株的毒力比親本株下降了約28倍。通過缺失株和親本株對Vero細(xì)胞粘附入侵能力的研究，結(jié)果表明缺失株的粘附入侵能

4、力明顯低于親本株。上述結(jié)果表明DPPⅣ基因是鴨疫里氏桿菌的一個重要毒力基因，為進(jìn)一步研究DPPⅣ基因在細(xì)菌致病中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　 2鴨疫里氏桿菌aroA基因缺失株的構(gòu)建
　　 參照GenBank中RA-YM株的aroA基因序列，以RA-YM株的基因組為模板，采用PCR法擴(kuò)增aroA基因的左右同源臂序列，在左右同源臂序列中間插入壯觀霉素抗性基因序列（含啟動子），連接到自殺性質(zhì)粒pRE112上，構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒pR