鴨疫里氏桿菌06537-06542基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌(Riemerella anatipestifer，RA)感染是當(dāng)前危害全球養(yǎng)鴨業(yè)的重要傳染病之一。目前發(fā)現(xiàn)RA至少有21種血清型。但即使是在同一種血清型中，不同來源菌株之間的毒力也存在較大差異。一旦鴨疫里氏桿菌感染鴨群，它可以造成該病的廣泛流行且徹底根除十分困難，而且存在反復(fù)感染發(fā)作的可能性，所以我們急需要一種安全有效的疫苗以預(yù)防該病。而目前有關(guān)鴨疫里氏桿菌感染的分子致病機(jī)理及免疫機(jī)制的研究報道較少。運(yùn)用分子生物學(xué)的方法深

2、入研究鴨疫里氏桿菌感染的分子致病機(jī)理及免疫機(jī)制來預(yù)防該病的發(fā)生是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。
　　本研究以鴨疫里氏桿菌血清1型云夢株(RA-YM)為親本株，選取了其中一對雙組份調(diào)控系統(tǒng)06537/06542為研究對象，通過構(gòu)建重組自殺性質(zhì)粒，采用接合轉(zhuǎn)移方法構(gòu)建了RA-YM株的06537/06542基因缺失株，對該基因缺失株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，并比較了其與RA-YM親本株對雛鴨的致病性。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1構(gòu)建了RA-Y

3、M06537/06542基因缺失株
　　根據(jù)RA-YM株06537/06542基因的序列，通過重組自殺性質(zhì)粒pRE112-LSR，利用接合轉(zhuǎn)移同源重組成功構(gòu)建了RA-YM06537/06542基因缺失株。
　　2體外比較研究RA-YM06537/06542基因缺失株的生物學(xué)特性
　　生化鑒定結(jié)果顯示，RA-YM06537/06542基因缺失株的生化特性與親本株基本一致，但缺失株不產(chǎn)生H2S，不液化明膠;通過生長曲線的測

4、定，發(fā)現(xiàn)RA-YM06537/06542基因缺失株的生長速度比親本株慢;RA-YM06537/06542基因缺失株耐酸耐堿能力較親本株顯著下降;藥敏試驗結(jié)果表明，缺失株對阿莫西林、氯霉素、氨芐青霉素和磺胺異惡唑耐藥性較親本株顯著升高，但對四環(huán)素耐藥性有所下降;RA-YM06537/06542基因缺失株對膽鹽和高滲的耐受力較親本株均顯著下降;SDS-PAGE結(jié)果顯示RA-YM06537/06542基因缺失株全菌蛋白的表達(dá)譜與親本株相比呈現(xiàn)

5、出明顯的差異;透射電鏡結(jié)果顯示，RA-YM06537/06542基因缺失株形態(tài)結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變。
　　3 RA-YM06537/06542基因缺失株對雛鴨致病性的影響
　　通過對12日齡雛鴨接毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA-YM06537/06542基因缺失株的LD50大于1.0×1010CFU，而親本株的LD50為4.0×107 CFU，RA-YM06537/06542基因缺失株的毒力顯著下降;通過測定缺失株和親本株感染雛鴨心、肝、脾、腦