膽維丁乳通過(guò)調(diào)節(jié)焦亡信號(hào)通路緩解實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎.pdf

1、炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是免疫介導(dǎo)的一組特發(fā)性疾病，以反復(fù)發(fā)作的慢性腸道炎癥為特點(diǎn)，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn's disease，CD)。UC屬于一種非特異性炎癥，病變好發(fā)于大腸，呈彌漫的連續(xù)性分布，直腸和乙狀結(jié)腸為主要受累部位。其典型的臨床過(guò)程包括黏液膿血便，腹痛和腹瀉。CD是一種胃腸道慢性炎癥，其病變主要位于回腸部，可以

2、發(fā)生在從口腔到肛門的腔道內(nèi)任何部位，也可發(fā)生在胃腸道以外的其他部位。CD主要表現(xiàn)為腹瀉、腸道黏膜的炎癥和潰瘍，可出現(xiàn)消化障礙、腹痛、血便、營(yíng)養(yǎng)不良、發(fā)育緩慢等現(xiàn)象。IBD病程遷延反復(fù)影響患者生活質(zhì)量、而且病因尚不明確又耗費(fèi)衛(wèi)生資源，所以其發(fā)病機(jī)制及治療一直倍受關(guān)注。
　　細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)并證實(shí)的一種新的細(xì)胞程序性死亡方式，其特征為依賴于半胱天冬酶-1(caspase-1)，同時(shí)伴隨大量促炎因子的釋放。研

3、究表明，細(xì)胞焦亡廣泛參與炎癥性疾病的發(fā)生與發(fā)展。同時(shí)，大量研究已經(jīng)表明維生素D(VD)及維生素D受體(VDR)機(jī)制能夠?qū)ρ装Y性腸病有一定的緩解作用。然而作為維生素D的前體物質(zhì)膽維丁乳(Cholecalciterol Cholesterol Emulsion，CCE)對(duì)炎癥性腸病是否具有緩解作用目前并無(wú)相關(guān)報(bào)道。因此主要利用三硝基苯磺酸(2，4，6-trinitrobenzenesulfonic acid，TNBS)誘導(dǎo)的IBD模型探討C

4、CE是否對(duì)炎癥性腸病具有緩解作用以及焦亡信號(hào)通路是否參與其中。
　　方法：
　　將7-8周齡的babl/c雄性小鼠隨機(jī)分為四組依次為對(duì)照組(Con)、膽維丁乳飲水組(CCE)、三硝基苯磺酸造模組(TNBS)、TNBS造模并進(jìn)行膽維丁乳飲水干預(yù)組（CCE+TNBS）。膽維丁乳飲水的處理方式為:10ul膽維丁乳加入100ml水中飲用。所有加膽維丁乳的飲水瓶都進(jìn)行避光處理。2周后，將5％的TNBS水溶液與無(wú)水乙醇等體積混合，以10

5、0 mg/kg TNBS為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)禁食不禁飲的小鼠麻醉后進(jìn)行直腸灌注TNBS乙醇溶液誘導(dǎo)炎癥性腸病模型。對(duì)照組以相同的方式直腸灌注TNBS的溶劑50％乙醇溶液。根據(jù)不同研究目的，分別在造模三到五天后進(jìn)行取材，處死前兩小時(shí)腹腔注射50 mg/kg的BrdU。取材時(shí)通過(guò)肉眼以及鏡下觀察小鼠結(jié)腸變化進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分及結(jié)腸損傷評(píng)分。在造模過(guò)程中對(duì)小鼠的生存狀態(tài)以及體重、飲食飲水的改變進(jìn)行記錄。Western Blot及Real Time PCR檢測(cè)

6、小鼠結(jié)腸中的VDR、凋亡相關(guān)點(diǎn)樣蛋白(ASC)、caspase-1、白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)、白介素6(IL-6)的蛋白和mRNA水平的表達(dá)。利用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色觀察腸上皮細(xì)胞的增殖情況，利用TUNEL染色觀察腸上皮細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.相同的TNBS處理后，與正常飲水組相比膽維丁乳飲用組的老鼠生存率明顯偏高、體重下降較少、飲水及飲食量下降的也較低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義。
　　2.TNBS處理后的小鼠結(jié)腸明顯變短變粗、充血嚴(yán)重，鏡下觀察炎癥細(xì)胞明顯增多、炎癥評(píng)分明顯升高，而飲用膽維丁乳的小鼠一系列癥狀都得到改善。
　　3.飲用膽維丁乳后，VDR的蛋白水平和mRNA水平表達(dá)都明顯增強(qiáng)。
　　4.TNBS處理組的小鼠，腸上皮細(xì)胞凋亡情況最顯著增殖速率最快。相反飲用膽維丁乳的小鼠，腸上皮細(xì)胞得到了明顯的保護(hù)。
　　5.ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-6的