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文檔簡介
1、目的:
1.探討中藥袁氏生脈成骨片治療激素性股骨頭缺血壞死(Steroid-inducedOsteonecrosis of Femoral Head SONFH)的臨床療效。
2.探索microRNA在SONFH患者外周血中的差異表達,分析差異表達的microRNA可能的調控作用。
3.尋找中藥干預SONFH兔模型中microRNA的差異表達,分析中藥調控microRNA表達治療SONFH可能的機理。
2、> 方法:
1.觀察26例SONFH患者口服袁氏生脈成骨片每日3次,每次6粒,共服3個月,記錄并比較SONFH患者服用藥物前、服藥1個月、服藥2個月和服藥3個月患側髖關節(jié)Harris評分、VAS評分,收集數據進行統(tǒng)計學分析。評價服用袁氏生脈成骨片對SONFH患者髖關節(jié)Harris評分、VAS評分的影響。
2.選取2014年7月~2015年2月廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院關節(jié)科門診就診的ARCOⅡ期SONFH患者6例(
3、觀察組)及同期廣州中醫(yī)藥大學在校健康志愿者6例作為對照組。采集兩組研究對象血漿,采用microRNA Real-time PCR芯片篩選差異表達的microRNA。根據TargetScan、mirBase及miRanda三個數據庫預測差異表達microRNA的靶基因并進行生物信息學分析。
3.選取普通級健康成年新西蘭兔,體重2.5~3.0kg,雌雄各半,共30只。以隨機數字表法分為中藥組、對照組和空白組,各10只。中藥組和對照
4、組每只每日以內毒素10ug/kg為總量,經耳緣靜脈分2次進行注射,共注射2日,于第3次注射內毒素時以甲強龍40mg/kg行臀肌注射,而后每間隔24h以甲強龍40mg/kg注射1次,共注射甲強龍3次??瞻捉M于相同時間點注射等量生理鹽水,注射期間各組兔均臀肌注射青霉素4萬單位/只,預防感染。中藥組于最后一次注射甲強龍時以袁氏生脈成骨片0.4片/kg灌胃,對照組及空白組以相同計量生理鹽水灌胃,灌胃8周。于造模4周時,中藥組與對照組各隨機選取1
5、只兔,取股骨頭樣品行HE染色,觀察造模成功與否。灌胃完成后收集兔血漿采用高通量測序法測定其microNRA相對表達量,篩選出觀察組、對照組較空白組差異表達的microRNA,獲取此調控途徑中的關鍵microRNA進行生物信息學分析。
結果:
1.口服袁氏生脈成骨片前、服藥1個月、服藥2個月、服藥3個月患側髖關節(jié)Harris評分分別為38.17±4.02,39.83±3.97、42.67±2.25和44.33±3.20
6、,患側髖關節(jié)VAS評分分別為6.83±0.41、6.33±0.52、5.00±0.89和4.33±0.52,服藥前與服藥2、3個月相比較均具有統(tǒng)計學差異。
2.SONFH患者血漿中采用microRNA Real-time PCR芯片檢測752個microRNA,兩組差異表達的microRNA18個,其中觀察組上調13個,下調5個。共篩選出交集靶基因887個。GO分析顯示,觀察組較對照組差異表達microRNA調控的靶基因功能主
7、要包括解剖結構形態(tài)、間充質細胞增殖、細胞的代謝過程等,Pathway分析顯示靶基因明顯富集于多條信號通路。
3.在SONFH兔模型實驗中采用miRDeep2.0進行microRNA預測,共預測出887個可能microRNA。對照組與空白組之間存在差異表達的microRNA,經同源性分析篩選出與之對應的人類microRNA:hsa-miR-941和hsa-miR-187。并且hsa-miR-941和hsa-miR-187表達量在
8、空白組、對照組和中藥組間呈現先升高再回落的表達趨勢。hsa-miR-187可調控細胞凋亡和血管生成。MAPK信號通路在中藥組與空白組差異表達的microRNA靶基因中富集明顯。
結論:
1.袁氏生脈成骨片可有效改善ARCOⅡ期SONFH患者患側髖關節(jié)Harris評分和VAS評分。
2.本研究發(fā)現SONFH患者血漿中microRNA較正常人出現差異表達,說明這些差異表達的microRNA可能作為篩選SONFH
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