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文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景:
股骨頭壞死(osteonecrosisoffemoralhead,ONFH)是常見(jiàn)骨關(guān)節(jié)疾病,多發(fā)生于青壯年患者,其確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確。因疾病早期無(wú)特異性臨床表現(xiàn),且缺乏簡(jiǎn)捷有效的早期診斷手段,股骨頭壞死確診時(shí)多在病變晚期,眾多患者最終需行髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)。而髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)費(fèi)用高昂、創(chuàng)傷較大,且假體壽命有一定局限性,對(duì)于多數(shù)患者而言,通過(guò)早期的手術(shù)及藥物干預(yù),改變疾病進(jìn)程,避免出現(xiàn)股骨頭塌陷和功能障礙,可
2、能是更好的治療選擇。而這有賴于股骨頭壞死病因的明確及早期診斷方式的進(jìn)步。
現(xiàn)有的研究表明,ONFH的發(fā)生可能與內(nèi)皮細(xì)胞損傷、干細(xì)胞分化異常、骨細(xì)胞凋亡和機(jī)體高凝狀態(tài)等因素有關(guān)。而microRNA作為內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA,參與細(xì)胞凋亡、干細(xì)胞分化、脂肪代謝等過(guò)程的調(diào)控,提示microRNA可能參與股骨頭壞死的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明microRNA在循環(huán)中穩(wěn)定存在,且在前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤患者以及心肌梗
3、死、糖尿病等患者血清中miRNA表達(dá)譜呈現(xiàn)特異性變化,因而循環(huán)miRNA可作為一種潛在的新型標(biāo)志物,有望實(shí)現(xiàn)疾病的早期診斷。
研究中我們推測(cè)股骨頭壞死患者血漿中也存在其特異表達(dá)的miRNA,這種特異表達(dá)的血漿miRNA參與股骨頭壞死的調(diào)控過(guò)程,并有可能成為一種股骨頭壞死的早期診斷標(biāo)志物。利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)股骨頭壞死患者進(jìn)行血漿miRNA高通量測(cè)序,并通過(guò)生物信息學(xué)分析,尋找患者特異表達(dá)的血漿miRNA,有助于進(jìn)一步明確股
4、骨頭壞死的發(fā)病機(jī)制,也可以為股骨頭壞死的早期診斷研究提供新的思路。
研究目的:
1.構(gòu)建激素性股骨頭壞死患者與對(duì)照組間的血漿miRNA文庫(kù)
2.應(yīng)用Illumina高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行血漿miRNA測(cè)序
3.應(yīng)用生物信息學(xué)分析比較股骨頭壞死患者與對(duì)照組的血漿miRNA表達(dá)差異
4.?dāng)?shù)據(jù)庫(kù)檢索差異表達(dá)的miRNA,并分析其可能的調(diào)控作用
研究方法:
5、 1.采集3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者以及性別、年齡匹配的3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和3例健康志愿者的外周血血漿,使用miRNeasyMiniKit(Qiagen,217004)提取血漿RNA并構(gòu)建smallRNA的文庫(kù)。
2.使用Illumina公司第二代高通量測(cè)序平臺(tái)HiSeq2000測(cè)序儀,采用單向末端直接測(cè)序,進(jìn)行SmallRNA的高通量測(cè)序分析,獲得各樣本miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)。
6、 3.將9個(gè)樣本分為3組,每組包含性別、年齡配比的系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和健康志愿者各1例。經(jīng)組內(nèi)比較和組間重復(fù)后獲取股骨頭壞死特異表達(dá)的血漿miRNA。
4.互聯(lián)網(wǎng)結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)檢索已篩選出的候選miRNA,預(yù)測(cè)到miRNA作用的靶位點(diǎn),并分析其可能的調(diào)控作用。
研究結(jié)果:
1.從系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、狼瘡對(duì)照患者及健康對(duì)照者的血漿中
7、提取出足量的miRNA,并成功構(gòu)建miRNA文庫(kù)。
2.使用Illumina高通量測(cè)序技術(shù)成功實(shí)現(xiàn)血漿miRNA測(cè)序。
3.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)27個(gè)股骨頭壞死特異表達(dá)的血漿miRNA。其中15個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào),12個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)。
結(jié)論:
1.通過(guò)構(gòu)建激素性股骨頭壞死患者血漿miRNA的cDNA文庫(kù)和Illumina高通量測(cè)序技術(shù),首次進(jìn)行了激素性股骨頭壞死患者血漿miR
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