單純皰疹病毒1型感染恒河猴模型的建立及其致病性的研究.pdf

1、單純皰疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus type1，HSV-1）是人群中感染率最高的病毒之一，它的最主要的特征是能在受感染的宿主中建立終身潛伏并定期激活形成復發(fā)感染。因此，該病毒的感染一直是多年以來難以控制的臨床流行病。而研究HSV-1的致病特點和機理成為了HSV-1臨床流行及預防的重點，由于許多臨床病例初次感染后無癥狀和病毒的嗜神經(jīng)性特點，很難在臨床上研究人的HSV-1感染，因此，尋找合適的研究載體——動物模型則是

2、這一研究工作的主要內(nèi)容。
　　長期以來，動物模型是研究各種人類疾病不可缺少的工具，動物模型的發(fā)展推動著醫(yī)學生物學研究的進步。建立合適的動物模型已成為目前生物科學研究的重大需求和關(guān)注熱點。現(xiàn)有的工作表明，靈長類動物在進化關(guān)系上與人類最為接近，是較為理想的用于人類疾病發(fā)病機制、藥物治療和疫苗開發(fā)的實驗動物，現(xiàn)已廣泛應用于各種傳染性疾病的研究領(lǐng)域。但有關(guān)HSV-1感染的靈長類動物模型研究至今尚未形成系統(tǒng)。
　　基于過去靈長類動物模

3、型在人類感染性疾病中所體現(xiàn)出的優(yōu)勢。本論文研究中，模擬人類自然接觸感染HSV-1的過程，取103 CCID50/ml的HSV-1-8F毒株經(jīng)口唇黏膜上皮組織和眼角膜上皮組織途徑感染恒河猴，比較HSV-1經(jīng)兩種途徑感染恒河猴后的致病特點。原發(fā)感染后對急性感染期恒河猴的臨床特征、體溫、血常規(guī)指標、淋巴細胞變化情況、血清中和抗體效價進行觀察，同時通過實時熒光定量PCR方法檢測眼、鼻、口、尿、肛拭子、血液中的病毒載量和不同組織器官中的病毒分布情

4、況，進一步觀察組織的病理變化并通過免疫組織化學技術(shù)對口唇皰疹組織和部分神經(jīng)系統(tǒng)組織進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSV-1感染恒河猴后可造成恒河猴體溫升高，形成口唇皰疹等臨床癥狀，口唇黏膜感染的恒河猴相比于眼角膜感染的恒河猴，首次出現(xiàn)口唇皰疹的臨床表現(xiàn)較早且癥狀較為嚴重。血常規(guī)的檢測結(jié)果顯示感染后恒河猴外周血單核細胞比例顯著上升，超出正常范圍值，其他血細胞的比例均在正常范圍內(nèi)有所變化。實時定量PCR檢測感染后1至10天的眼、鼻、口、尿、肛拭子及血液

5、中的病毒載量結(jié)果顯示，這些部位的分泌物均可敏感顯示病毒載量的變化，另外血液中的病毒DNA于感染后的第6天亦出現(xiàn)明顯的升高，拭子和血液的病毒載量和出現(xiàn)口唇皰疹的臨床癥狀存在一定的關(guān)系。組織中病毒的分布結(jié)果顯示可從感染恒河猴的部分神經(jīng)系統(tǒng)的、淋巴系統(tǒng)和部分其他器官組織中檢測到病毒DNA的存在。不同感染方式導致的病毒的在體內(nèi)的分布方式具有明顯差異。恒河猴部分神經(jīng)系統(tǒng)和口唇皰疹病理組織學觀察結(jié)果顯示HSV-1感染恒河猴后可造成嚴重的口唇皰疹性皮

6、損，但中樞神經(jīng)組織未見明顯病理變化。與此同時通過免疫組織化學技術(shù)可于中樞神經(jīng)組織中檢測到HSV-1的存在。本研究的長期觀察表明感染后在六個月至一年后，動物能夠出現(xiàn)類似潛伏感染的復發(fā)感染所表現(xiàn)的出的口唇皰疹的臨床癥狀，采用普通PCR即可檢測到恒河猴各種分泌物中的病毒。同時，臨床觀察提示，潛伏感染于恒河猴的HSV-1會在某些條件下激活并再次引起口唇皰疹。利用恒河猴神經(jīng)組織共培養(yǎng)體外激活病毒的實驗證實，病毒存在于三叉神經(jīng)和橋腦中，其可以通過這

7、些均質(zhì)化組織在體外與外源細胞共培養(yǎng)的方式，激活潛伏的病毒。另外，采用RNA測序技術(shù)對HSV-1感染恒河猴后0，4，8，12，60，150天外周血淋巴細胞的轉(zhuǎn)錄本變化情況進行檢測和分析比較。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)感染后有52個基因存在顯著差異，這些基因涉及到免疫系統(tǒng)、細胞進程和相互作用、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)導調(diào)節(jié)等，該結(jié)果說明HSV-1感染恒河猴后激活了機體的免疫系統(tǒng)，導致血液中相關(guān)的免疫相關(guān)細胞因子及趨化蛋白的改變。
　　本研究獲得的結(jié)果提示了一個