銅綠微囊藻對(duì)羅氏沼蝦和大型溞毒性作用的研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著環(huán)境污染的加重，水資源受到了嚴(yán)重的威脅，越來(lái)越多的淡水水體出現(xiàn)富營(yíng)養(yǎng)化問(wèn)題，同時(shí)伴隨而來(lái)的藍(lán)藻水華也已經(jīng)影響到了人們?nèi)粘Ｉa(chǎn)與生活用水的安全。微囊藻毒素(Microcysfins，MCs)作為藍(lán)藻細(xì)胞合成的二級(jí)代謝產(chǎn)物，是富營(yíng)養(yǎng)化水體中因藍(lán)藻爆發(fā)而產(chǎn)生的最常見(jiàn)的藻毒素，具有強(qiáng)烈的肝毒性和腫瘤促進(jìn)作用，尤其在發(fā)生微囊藻水華的水體中，生物多樣性明顯下降，對(duì)水生生物造成了較大的影響。枝角類(lèi)浮游動(dòng)物作為水生生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)轉(zhuǎn)化和能量傳

2、遞的重要環(huán)節(jié)，在維持水體生態(tài)系統(tǒng)平衡方面有著至關(guān)重要的作用，如果其生長(zhǎng)和繁殖受到微囊藻的影響將會(huì)影響到整個(gè)生物鏈的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。本文將從枝角類(lèi)大型潘(Daphniamagna)的生長(zhǎng)、繁殖、存活以及種群變化的角度去探討銅綠微囊藻的毒性作用。作為淡水養(yǎng)殖的主要品種，羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)的生長(zhǎng)和發(fā)育也會(huì)受到微囊藻影響，并可能引起肝胰腺等內(nèi)部器官的病理變化、導(dǎo)致蝦體的氧化損傷等。本文就這一問(wèn)題，針對(duì)銅綠微囊

3、藻(Microcystisaeruginosa)對(duì)羅氏沼蝦存活、生長(zhǎng)、組織器官的損傷進(jìn)行研究。
　　 微囊藻毒素檢測(cè)方法的建立及微囊藻中毒素含量的測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下培養(yǎng)銅綠微囊藻，以其作為實(shí)驗(yàn)用藻。依據(jù)高效液相色譜液-質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用技術(shù)在生物毒素檢測(cè)分析上的優(yōu)勢(shì)，結(jié)合微囊藻的形態(tài)特征，建立起了一套較為穩(wěn)定的HPLC-MS檢測(cè)MCs的方法。能夠快速準(zhǔn)確的對(duì)銅綠微囊藻溶液中含有的微量毒素進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)過(guò)檢測(cè)，確定了實(shí)驗(yàn)室

4、培養(yǎng)的銅綠微囊藻所含微囊藻毒素的主要種類(lèi)為MC-LR，且其含量為0.3fmol/cell。在這一檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，我們根據(jù)水生動(dòng)物組織所具有的特點(diǎn)，通過(guò)改進(jìn)得到了一套能夠穩(wěn)定、準(zhǔn)確檢測(cè)組織內(nèi)MCs的方法，為今后的檢測(cè)分析工作提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。
　　 為探索銅綠微囊藻對(duì)大型潘的生長(zhǎng)和繁殖影響，實(shí)驗(yàn)將大型溞暴露于濃度為1.5×106，3×106，0.75×107和1.5×107cell/ml的微囊藻溶液中，實(shí)驗(yàn)中觀察到大型溞攝

5、食銅綠微囊藻的現(xiàn)象，得到96h銅綠微囊藻對(duì)大型溞半致死濃度(LD50)為1.752×107cell/ml，表明銅綠微囊藻對(duì)大型溞有很強(qiáng)的急性毒性。另外還發(fā)現(xiàn)，銅綠微囊藻對(duì)大型溞的體長(zhǎng)、壽命、產(chǎn)卵數(shù)和種群數(shù)量都有影響，且抑制作用的大小與微囊藻細(xì)胞密度正相關(guān)。
　　 本文采用靜水式生物測(cè)試法研究銅綠微囊藻對(duì)羅氏沼蝦的毒性影響。將體長(zhǎng)10.33±1.44mm的羅氏沼蝦幼體暴露于濃度為1×106，5×106，10×106，20×106和

6、30×106cell/ml的銅綠微囊藻溶液中，在水溫25℃下，發(fā)現(xiàn)高濃度銅綠微囊藻溶液對(duì)沼蝦具有毒害作用，致使沼蝦死亡，同時(shí)也得到了144和168h的半致死濃度(LD50)，分別為36.08×106和28.81×106cell/ml。
　　 在急性毒性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了銅綠微囊藻對(duì)羅氏沼蝦生長(zhǎng)的影響。體長(zhǎng)為8.1±0.58mm的羅氏沼蝦，在濃度為2×106，10×106cell/ml的銅綠微囊藻溶液中持續(xù)飼養(yǎng)80d，隨著

7、時(shí)間的延長(zhǎng)生長(zhǎng)速率變慢，與對(duì)照組的差異顯著(P<0.05)。另外還對(duì)暴露在銅綠微囊藻溶液中的沼蝦進(jìn)行了組織學(xué)觀察。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組沼蝦鰓絲明顯增粗，鰓絲組織受到部分損傷，說(shuō)明銅綠微囊藻在影響沼蝦生長(zhǎng)的同時(shí)對(duì)羅氏沼蝦的組織器官也造成了損傷。
　　 借助已經(jīng)得到的結(jié)果，主要針對(duì)易受損器官，進(jìn)一步研究了微囊藻毒素在組織器官的累積。將羅氏沼蝦在3×106cell/ml的藻液中飼養(yǎng)45d，使用HPLC-MS法檢測(cè)肝胰腺、肌肉、眼柄、心