微囊藻毒素在大型溞和羅氏沼蝦體內(nèi)的生物累積和傳遞.pdf

1、微囊藻毒素(microcystin,MC)可以在生物體內(nèi)累積并能通過食物鏈進行傳遞。各種水生生物的研究已經(jīng)證明,微囊藻毒素可以在浮游動物,雙殼類,甲殼類和魚類生物體內(nèi)積累,甚至在某些水生脊椎動物體內(nèi)積累,如龜,鴨,水禽等。銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)產(chǎn)生的微囊藻毒素對人類健康也有潛在的影響。本文系統(tǒng)報道了微囊藻毒素MC-LR在大型溞(Daphnia magna)和羅氏沼蝦(Macrobrachium ros

2、enbergii)體內(nèi)進行生物累積的情況;證實了微囊藻毒素MC-LR可通過食物鏈進行傳遞并在蝦體內(nèi)累積的情況。由于 MC-LR在生物樣品中的濃度通常很低,干擾物質(zhì)多,因而本研究建立了一種生物體內(nèi)微囊藻毒素的檢測方法,并通過有效的富集、分離和純化過程實現(xiàn)高靈敏度、高專屬性分析,為蝦類健康養(yǎng)殖和食品安全管理提供科學(xué)依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC),建立了一種生物體內(nèi)微囊藻毒素MC

3、-LR的檢測方法,并在銅綠微囊藻、大型溞和羅氏沼蝦的樣品中獲得檢測結(jié)果,適用于研究微囊藻毒素在生物體內(nèi)的累積、傳遞和代謝解毒以及對水產(chǎn)品的安全性進行評估。MC-LR的檢測結(jié)果在1～250ng/mL范圍內(nèi)線性良好。根據(jù)動物源性水產(chǎn)品樣品的情況,建立了固相萃取前處理方法(SPE法)。此方法都能可靠地完成水產(chǎn)品中MC-LR的檢測要求,檢測限LOD和定量限LOQ分別為0.0075μg/g和0.01575μg/g較低,回收率在98.4％～103.

4、4%之間:相對標準偏差小于13%。
　　2.大型溞攝食銅綠微囊藻24h時間內(nèi)MC-LR的平均含量為(1.12±0.12)μg g?1,MC-LR分別在10h和16h達到峰值(2.42±0.25)μg g?1和(2.72±0.09)μg g?1;前6h大型溞體內(nèi)MC-LR的含量差異不顯著(P>0.05),8h時MC-LR的含量極顯著升高(P<0.01);10h時達到第一個峰值,之后到12h時MC-LR的含量極顯著降低(P<0.01)

5、;然后又極顯著升高(P<0.01),16h時達到第二個峰值,之后又極顯著降低(P<0.01)。
　　3.羅氏沼蝦暴露于微囊藻藻液中24h,MC-LR未能在肌肉樣品中檢測出,血液樣品MC-LR在8h被檢測到,含量為0.15±0.004μg/g,其他取樣時間點MC-LR未能被檢測出。鰓絲中 MC-LR的含量在2、8、16和24 h依次為(2.16±0.19)、(6.08±0.59)、(3.57±0.44)和(0.89±0.08)μg/

6、g;肝胰腺中MC-LR的含量在2、8、16和24 h依次為0.02、(0.06±0.01)、(0.19±0.03)和(0.20±0.04)μg/g;消化道中MC-LR的含量在2、8、16和24 h依次為(0.35±0.02)、(0.77±0.07)、(0.69±0.08)和(0.56±0.02)μg/g。MC-LR的含量并不是隨著時間的延長而增加,每一種組織累積的含量不同:鰓絲>消化道>肝胰腺。
　　4.羅氏沼蝦攝食有毒大型溞8h

7、后,鰓絲、肝胰腺和消化道MC-LR的含量分別為(0.05±0.005)、(0.04±0.02)和(0.05±0.01)μg g?1;16h后肝胰腺和消化道MC-LR的含量分別為(0.05±0.01)和(0.14±0.01)μg g?1;24h后血液、肝胰腺和消化道MC-LR的含量分別為(0.02±0.005)、(0.10±0.02)和(0.40±0.04)μg g?1。羅氏沼蝦肌肉中未檢測出MC-LR,肝胰腺和消化道MC-LR的含量隨時

8、間的延長而增加,消化道累積了更多的MC-LR。
　　5.銅綠微囊藻、大型溞和羅氏沼蝦構(gòu)成了一個簡單的水生食物鏈,試驗24h期間,MC-LR未能在肌肉樣品中檢測出,血液樣品MC-LR在2h被檢測到,含量為0.03±0.005μg/g,其他取樣時間點MC-LR未能被檢測出。鰓絲中MC-LR的含量在2、8、16和24h依次為(0.37±0.04)、(1.59±0.09)、(1.66±0.18)和(1.11±0.12)μg/g;肝胰腺中M

9、C-LR的含量在2、8、16和24h依次為(0.17±0.02)、(0.18±0.01)、(0.40±0.04)和(0.49±0.04)μg/g;消化道中MC-LR的含量在2、8、16和24h依次為(0.62±0.16)、(1.34±0.08)、(2.19±0.30)和(1.29±0.11)μg/g。MC-LR的含量并不是隨著時間的延長而增加,每一種組織累積的含量不同:消化道>鰓絲>肝胰腺。
　　6. MC-LR在羅氏沼蝦各組織的

10、分布情況是不同的。羅氏沼蝦暴露于銅綠微囊藻試驗中(用 A表示),2h時鰓絲(85%)>消化道(14%)>肝胰腺(1%);8h鰓絲(86%)>消化道(11%)>血液(2%)>肝胰腺(1%);16h時鰓絲(80%)>消化道(16%)>肝胰腺(4%);24h時鰓絲(54%)>消化道(34%)>肝胰腺(12%)。羅氏沼蝦攝食冷凍干燥的有毒大型溞試驗中(用B表示),8h時鰓絲(36%)=消化道(36%)>肝胰腺(28%);16h時消化道(74%)