泥鰍和大鱗副泥鰍雜交育種初步研究.pdf

1、泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)和大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)分別隸屬于鰍科(Cobitidae)、花鰍亞科(Cobitinae)中的泥鰍屬（Misgurnus）和副泥鰍屬（Paramisgurnus）。我國廣泛分布有天然二倍體(2n=50)、四倍體(4n=100)泥鰍以及大鱗副泥鰍(2n=48)，這為泥鰍的多倍體育種提供了豐富的資源。本論文利用二倍體(D)、四倍體(T)泥鰍和

2、大鱗副泥鰍(P)間的自交與正、反雜交，獲得9種細(xì)胞型子代，分別為(♀×(♂))：D×D、D×T、D×P、T×D、T×T、T×P、P×D、P×T和P×P。然后對這9組子代進(jìn)行了生長性能比較和細(xì)胞學(xué)研究，主要研究內(nèi)容如下：
　　 1．泥鰍與大鱗副泥鰍自交與雜交子代生長性能比較
　　 (1)受精率和相對孵化率：二倍體、四倍體泥鰍和大鱗副泥鰍自交與雜交的受精卵均可正常發(fā)育，并孵出幼苗。P×P組的受精率(93.10％)顯著高于其它

3、組(P＜0.05)，而D×T組的受精率最低(66.62％)，顯著低于其它組(P＜0.05)。其它組的受精率由高到低依次為P×D＞P×T＞D×P＞T×P＞D×D＞T×D＞T×T。相對孵化率最高的是T×T(78.42%)，顯著高于其它組(P＜0.05)，而P×T(55.91%)最低，顯著低于其它組（P＜0.05）。數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，四倍體泥鰍精子的受精能力低于二倍體泥鰍和大鱗副泥鰍，大鱗副泥鰍卵子的受精能力高于其它兩種。但是，以大鱗副泥鰍為

4、母本的雜交組合，相對孵化率均較低。
　　 (2)存活率比較：對各組子代泥鰍進(jìn)行了46周的養(yǎng)殖試驗，對46周時的存活率進(jìn)行比較，結(jié)果顯示D×D組的存活率最高，為52.77%，與其他組（除P×P外）存在顯著性差異(P＜0.05)，其次是P×P組，存活率為50.31%。T×D與D×T、T×P與T×T的存活率分別相當(dāng)，各為42.33%、41.00%、30.89%和28.78%。存活率最低的三組是P×D(19.05%)、D×P(17.89

5、%)和P×T(15.44%)。大鱗副泥鰍與泥鰍（二倍體、四倍體）的正反雜交子代存活率均較低，而二倍體與四倍體泥鰍之間的正反雜交子代存活率處于中等水平。具有存活率優(yōu)勢的組合為D×D與P×P。
　　 (3)生長差異：對各組泥鰍一個月內(nèi)生長的整體情況進(jìn)行對比分析可得，T×P組顯著高于其它組（P＜0.05），其次是P×D組，顯著高于余下其它的組合(P＜0.05)，最低的是D×D組，顯著低于其它組合(P＜0.05)。以二倍體泥鰍為母本的子

6、代泥鰍全長均低于其它組合。一個月以后，P×P表現(xiàn)出明顯的生長優(yōu)勢，全長與體重均顯著高于其它組合，第46周時，其平均全長與體重分別達(dá)到142.34mm與9.74g。以二倍體泥鰍為母本的子代泥鰍全長與體重增長依然低于其它組合。因此，在生長速度上，P×P組具有優(yōu)勢。
　　 (4)性腺比較：對各組子代泥鰍性腺的組織切片比較發(fā)現(xiàn)，T×T和P×P自交子代性腺發(fā)育最成熟，D×D、D×T和T×D居中，以大鱗副泥鰍為父母本的雜交子代性腺發(fā)育較緩慢

7、。雖然各組性腺發(fā)育快慢有所區(qū)別，但是單從組織切片角度來看，所有自交與正反雜交組合均可以產(chǎn)生成熟的生殖細(xì)胞。
　　 2．雜交子代的細(xì)胞學(xué)研究
　　 (1)紅細(xì)胞與紅細(xì)胞核大?。翰捎贸Ｒ?guī)血涂片法對各種子代泥鰍紅細(xì)胞大小進(jìn)行了測量，并分析比較了各組泥鰍紅細(xì)胞與紅細(xì)胞核的長軸、短軸、面積與體積，經(jīng)統(tǒng)計分析表明，紅細(xì)胞大小并不隨倍性而成比例增加。其中，三倍體T×D和T×P紅細(xì)胞體積分別為525.91μm3和581.83μm3，而四

8、倍體T×T的為523.36μm3，三倍體紅細(xì)胞體積反而比四倍體的大。因此，紅細(xì)胞大小不可以作為判斷泥鰍倍性的依據(jù)。而紅細(xì)胞核面積與體積可以反映泥鰍倍性的變化，二倍體、三倍體和四倍體子代泥鰍的紅細(xì)胞核面積與體積的比值分別約為2.00:2.50:2.98和2.00:2.61:3.34，雖然沒有呈現(xiàn)理論值2:3:4，但是所有子代泥鰍紅細(xì)胞核大小隨倍性的增加而增加，且不同倍性之間存在著顯著性差異。因此，紅細(xì)胞核大小可以作為鑒定泥鰍倍性的輔助手段

9、。
　　 (2)DNA含量：采用流式細(xì)胞計數(shù)法，分別以二倍體泥鰍和雞的紅細(xì)胞為內(nèi)參，對子代泥鰍紅細(xì)胞核DNA含量進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示，采用兩種參照測定的結(jié)果相同，D×D、D×P、P×D和P×P屬于二倍體；D×T、T×D、P×T和T×P屬于三倍體；T×T屬于四倍體，且三種類型DNA含量比值接近2:3:4。以雞血DNA含量(2.50pg/N)為標(biāo)準(zhǔn)，計算可得以上9種雜交子代DNA含量分別為3.16pg/N、5.08pg/N、3.11

10、pg/N、4.87pg/N、6.73pg/N、4.98pg/N、2.86pg/N、4.98pg/N和3.03pg/N。本研究結(jié)果表明流式細(xì)胞計數(shù)法是一種檢測DNA含量、判定魚類倍性準(zhǔn)確、快捷的方法。
　　 (3)染色體組型：采用PHA體內(nèi)注射法進(jìn)行染色體標(biāo)本的制備，并對子代泥鰍進(jìn)行了染色體計數(shù)與核型分析。結(jié)果顯示，D×D的染色體數(shù)2n=50，核型為8m+6sm+36t，臂數(shù)NF=64;T×T為4n=100，16m+12sm+72