微衛(wèi)星標(biāo)記輔助大鱗副泥鰍育種研究.pdf

1、大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)是我國一種重要的小型經(jīng)濟(jì)魚類，并且具有較大的出口創(chuàng)匯潛力。近年來，隨著捕撈強(qiáng)度的增加，大鱗副泥鰍的野生資源量正在逐漸減少，國內(nèi)已經(jīng)慢慢興起了大鱗副泥鰍的養(yǎng)殖熱潮。目前大鱗副泥鰍養(yǎng)殖的苗種主要來源于野生捕撈，優(yōu)良的苗種稀缺。因此，為了持續(xù)、穩(wěn)定和健康的發(fā)展大鱗副泥鰍養(yǎng)殖業(yè)，大鱗副泥鰍良種選育工作勢(shì)在必行。本研究擬采用跨種擴(kuò)增法和數(shù)據(jù)庫挖掘方法，開發(fā)獲得大鱗副泥鰍多態(tài)SSR，同時(shí)利

2、用多態(tài)SSR標(biāo)記對(duì)采集獲得的群體進(jìn)行遺傳多樣性分析;以各地理群體為基礎(chǔ)選育群體，利用雙列雜交方法，獲得大鱗副泥鰍選育F1代，測(cè)量其生長(zhǎng)性狀，進(jìn)而評(píng)估各群體間生長(zhǎng)性狀的雜交效果。本研究旨在為大鱗副泥鰍生長(zhǎng)性狀良種的進(jìn)一步選育打好基礎(chǔ)。本研究的主要研究結(jié)果如下:
　　1.大鱗副泥鰍微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)
　　從來自于已發(fā)表文章獲得的47對(duì)泥鰍的微衛(wèi)星引物序列中，共篩選出了10對(duì)帶型清晰、多態(tài)性較好的微衛(wèi)星引物，適用于大鱗副泥鰍群體的跨

3、種擴(kuò)增，并對(duì)各對(duì)引物的PCR擴(kuò)增退火溫度進(jìn)行了優(yōu)化，引物名稱、序列和退火溫度。并進(jìn)行瓊脂糖檢測(cè)。10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在大鱗副泥鰍群體的擴(kuò)增都很好，PCR產(chǎn)物在PAGE電泳都可以產(chǎn)生清晰的條帶。結(jié)果表明10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)從8到12個(gè)不等，平均每個(gè)位點(diǎn)上含有9.9個(gè)等位基因;而有效等位基因數(shù)均小于等位基因數(shù)，介于4.1388到9.5410之間。10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的觀測(cè)雜合度范圍為0.0256～0.5500，平均為0.3459;而期望雜合

4、度的范圍為0.7682～0.9074，平均為0.8577。本研究初步認(rèn)為，篩選出的10對(duì)泥鰍微衛(wèi)星標(biāo)記是適用于大鱗副泥鰍的，可以作為其遺傳學(xué)研究的良好標(biāo)記。
　　2.不同地理群體大鱗副泥鰍的遺傳多樣性分析
　　在大鱗副泥鰍4個(gè)地理群體中，共檢測(cè)到95個(gè)等位基因，平均每個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)出9.5個(gè)等位基因。群體的平均等位基因數(shù)目在5.200～10.000，位點(diǎn)的多態(tài)信息含量PIC在0.546～0.803，屬于中度到高度多態(tài)位點(diǎn)，等位基

5、因數(shù)最少的為河南群體，最多的為安徽群體，群體的期望雜合度HE在0.767～0.874，最低的是河南群體，最高的是安徽群體，平均值為0.836。群體觀察雜合度Ho在0.242～0.327，最低的為湖北群體，最高的為湖南群體，平均值為0.284。安徽群體的等位基因數(shù)目A和期望雜合度HE均為最大。由此可見，安徽群體的遺傳多樣性水平高于其他地區(qū)的群體。固定指數(shù)Fis表明這四個(gè)群體均表現(xiàn)為雜合子缺失（Fis＞0）。Hardy-Weinberg平衡

6、檢驗(yàn)表明各群體至少有5個(gè)位點(diǎn)偏離Hardy-Weinberg平衡(P＜0.05)。在Mac229-SSR、Mac425-SSR和Mac477-SSR位點(diǎn)所有的群體均偏離Hardy-Weinberg平衡(P＜0.05)。根據(jù)DA遺傳距離構(gòu)建系統(tǒng)樹，UPGMA聚類顯示四個(gè)地理群體主要聚為3類，湖北、安徽群體遺傳距離較小首先聚為一類，后與湖南群體聚為一類，而河南群體則單獨(dú)聚為一類。
　　3.不同地理群體大鱗副泥鰍的繁殖與子代生長(zhǎng)性狀配合

7、力的分析
　　在7個(gè)不同雜交或自交組合中，湖北群體自交種群獲得的子代全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、體厚和體重最大，明顯高于其他組合。其次為河南種群群體內(nèi)自交獲得的子代。河南種群作為母本和遼寧種群作為父本雜交獲得的子代全長(zhǎng)等生長(zhǎng)性狀數(shù)值最小。方差分析結(jié)果顯示，父本、母本和父本×母本均方都達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，說明父母本的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、體厚和體重的一般配合力(GCA)效應(yīng)間均存在極顯著差異，并且特殊配合力(SCA)也存在著極顯著的遺

8、傳差異。
　　一般配合力是指某一親本與其他親本配成的幾個(gè)F1的平均產(chǎn)量和所有組合的F1的總平均值的差值，特殊配合力分析是指某特定組合的平均值與其雙親的一般配合力的差值。前者主要受基因加性效應(yīng)的影響，后者受基因的顯性效應(yīng)和上位效應(yīng)影響。結(jié)果顯示，父本全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、體厚和體重的一般配合力(GCA)效應(yīng)值大小依次為湖北種群、湖南種群、河南種群、安徽種群、遼寧種群。母本全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、體厚和體重一般配合力效應(yīng)值由大至小依次為湖北種群