視網(wǎng)膜DRD1激活對小鼠屈光發(fā)育的影響.pdf

1、目的:
　　屈光不正是世界范圍內(nèi)最常見的眼部疾病和致盲的重要原因之一，其中近視的患病率在西方人群中已超過30％，在亞洲人則高達80％，同時近視相關(guān)眼部并發(fā)癥也隨之增多，如視網(wǎng)膜脫離、黃斑變性和青光眼等;近視患病率在近幾十年里急劇上升，初步估計在以后十年內(nèi)將有25億人受到近視的威脅。作為視網(wǎng)膜上一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)—DA在近視的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，但其作用部位、機制和方式均未明確。本實驗主要明確視網(wǎng)膜DRD1激活對小鼠屈光發(fā)育

2、的影響，為進一步探索近視發(fā)生的機制，尋找預(yù)防和控制近視的手段提供新的思路和方法。
　　方法:
　　采用D1-Cre雜合子小鼠與C57BL/6小鼠交配，繁殖出所需的D1-Cre雜合子小鼠與同窩仔野生型小鼠。(1)D1-Cre雜合子小鼠和同窩仔野生型小鼠，在小鼠3周齡、5周齡和7周齡時分別測量EIR、OCT等眼球生物參數(shù)，明確Cre酶的插入是否影響小鼠的屈光發(fā)育。(2)視網(wǎng)膜DRD1過表達對小鼠屈光發(fā)育的影響:3周齡D1-Cre

3、雜合子小鼠，按隨機數(shù)字表法分為:①同齡對照組(NC);②視網(wǎng)膜下注射AAV8-DIO-GFP組（Vector組）;③視網(wǎng)膜下注射AAV8-DIO-DRD1-GFP組（DRD1組）。各組分別給予視網(wǎng)膜下注射（0.5μL，1×1013顆粒/ml）相應(yīng)的載體病毒(NC組不注射)。在小鼠3周齡、5周齡和7周齡時分別測量EIR、OCT等眼球生物參數(shù);4周齡給予眼底拍照;6周齡給予ERG測量;7周齡EIR、OCT測量后取小鼠視網(wǎng)膜和鞏膜檢測DRD1

4、的表達量等。(3)視網(wǎng)膜Gq-D1激活對小鼠屈光發(fā)育的影響:3周齡的D1-Cre小鼠經(jīng)屈光檢測篩選后，按隨機數(shù)字表法分為:①視網(wǎng)膜下注射攜帶Gq-D1病毒，腹腔注射Saline組;③視網(wǎng)膜下注射攜帶Gq-D1病毒，腹腔注射CNO組。分別予病毒注射第二天腹腔注射Saline或CNO，在實驗過程中每天早上9點到10點鐘注射藥物。在小鼠3周齡、5周齡和7周齡時分別測量EIR、OCT等眼球生物參數(shù);4周齡給予眼底拍照;6周齡給予ERG測量;7周

5、齡EIR、OCT測量后取小鼠視網(wǎng)膜和鞏膜檢測Gq-D1的表達量等。
　　結(jié)果:
　　1.D1-Cre雜合子小鼠和同窩仔野生型小鼠的屈光及眼軸均無明顯差異。2.視網(wǎng)膜下注射DRD1過表達病毒后視網(wǎng)膜DRD1的表達量明顯增加，視網(wǎng)膜下注射空載體病毒視網(wǎng)膜DRD1的表達量無明顯變化。3.視網(wǎng)膜Gq-D1激活:CNO組相對于Saline組屈光明顯向近視方向偏移。
　　結(jié)論:
　　1.Cre酶的插入不影響小鼠的屈光發(fā)育;2