早產(chǎn)對(duì)大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育及氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變的影響.pdf

1、研究背景：
　　早產(chǎn)是一種常見(jiàn)的臨床現(xiàn)象,導(dǎo)致新生兒較高的死亡率和發(fā)病率。臨床證據(jù)表明,早產(chǎn)兒發(fā)生視覺(jué)損害和眼部疾病的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于足月兒。早產(chǎn)可影響視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)育,從而使得早產(chǎn)兒罹患血管性疾病的閾值降低,臨床上最為常見(jiàn)的表現(xiàn)是早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)。ROP是一種復(fù)雜的視網(wǎng)膜新生血管性疾病,因早產(chǎn)兒的血管發(fā)育異常所致。視網(wǎng)膜血管化越不成熟,發(fā)生嚴(yán)重ROP的風(fēng)險(xiǎn)就越大。小胎齡和低出生體重是公認(rèn)的發(fā)生ROP的最重要的

2、危險(xiǎn)因素。但是,作為一種多因素致病性疾病,ROP的病因和病理機(jī)制目前尚未闡明。
　　大鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(OIR)模型廣泛用于 ROP的實(shí)驗(yàn)研究中,其應(yīng)用基礎(chǔ)為新生大鼠發(fā)育不成熟的視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)與人類早產(chǎn)兒極其相似。然而,OIR采用的是足日齡生產(chǎn)的正常新生大鼠,它們出生時(shí)和出生后的病理生理狀態(tài)與早產(chǎn)兒有所不同。在新生大鼠中模擬早產(chǎn)兒出生后生長(zhǎng)受限的研究發(fā)現(xiàn),出生后的生長(zhǎng)發(fā)育情況決定了幼鼠正常視網(wǎng)膜血管化的速度和OIR中異常血管化的

3、程度。理論上,早產(chǎn)大鼠可在一定程度上模擬人類早產(chǎn)兒出生時(shí)的不成熟以及出生后的發(fā)育不良經(jīng)歷,能為研究“早產(chǎn)”這一因素在ROP中的作用提供一個(gè)良好的平臺(tái)。雖然早產(chǎn)大鼠模型已被廣泛用于研究人類發(fā)育相關(guān)性疾病,但目前有關(guān)早產(chǎn)大鼠的視網(wǎng)膜發(fā)育特點(diǎn)以及早產(chǎn)對(duì)大鼠OIR的影響尚無(wú)報(bào)道。
　　目的：
　　1.觀察早產(chǎn)大鼠的神經(jīng)視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜淺層毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)以及視網(wǎng)膜功能的發(fā)育特點(diǎn);
　　2.觀察早產(chǎn)大鼠在氧誘導(dǎo)條件下的視網(wǎng)膜血管病變

4、情況及視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)的表達(dá)水平。
　　方法
　　1.于Sprague Dawley(SD)大鼠孕19天時(shí)行剖宮產(chǎn),建立早產(chǎn)大鼠模型,觀察空氣中飼養(yǎng)的早產(chǎn)幼鼠的一般情況及體重變化。同時(shí)設(shè)正常足日齡生產(chǎn)的大鼠作為對(duì)照。
　　2.分別于幼鼠出生后4、7、10、14天行視網(wǎng)膜切片、HE染色及熒光標(biāo)記的isolectin B4視網(wǎng)膜血管染色、鋪片,觀察幼鼠視網(wǎng)膜各層細(xì)胞和淺

5、層血管形態(tài),測(cè)量神經(jīng)視網(wǎng)膜各層厚度和未血管化區(qū)面積;分別于幼鼠出生后14、21、28、35天行視網(wǎng)膜電圖(ERG)檢測(cè),記錄各波的波幅和潛伏期。
　　3.將新生大鼠在出生后6h內(nèi)置于80％/21%濃度、24h交替的動(dòng)物氧箱中,維持2周,于出生后15天返回空氣中飼養(yǎng),建立大鼠OIR模型;分別于出生后14、18、22天行熒光標(biāo)記的isolectin B4視網(wǎng)膜血管染色、鋪片,觀察視網(wǎng)膜血管形態(tài),測(cè)量視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)及新生血管區(qū)面積;采用

6、反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)視網(wǎng)膜中VEGF、IGF-1 mRNA的表達(dá)水平;于出生后18天行視網(wǎng)膜切片、HE染色,計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量。
　　結(jié)果：
　　1.剖宮產(chǎn)手術(shù)的成功率以及早產(chǎn)幼鼠的存活率較高。出生后3周內(nèi),早產(chǎn)幼鼠的體重低于足日齡幼鼠(P<0.001)。
　　2.早產(chǎn)幼鼠的視網(wǎng)膜各層細(xì)胞和淺層血管形態(tài)及發(fā)育趨勢(shì)與對(duì)照組相似;出生后早期,早產(chǎn)幼鼠的視網(wǎng)膜厚度大于對(duì)照組(P<0.0

7、5),2周時(shí)趨于一致;2周內(nèi)早產(chǎn)幼鼠的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)明顯大于對(duì)照組(P<0.001),2周時(shí)兩組的視網(wǎng)膜血管化均已完成;出生2周后,早產(chǎn)鼠的ERG波幅和潛伏期與對(duì)照組相似。
　　3.波動(dòng)氧干預(yù)后,早產(chǎn)幼鼠的視網(wǎng)膜一級(jí)血管迂曲程度與對(duì)照組相似;早產(chǎn)幼鼠14和18天的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)及18天的視網(wǎng)膜新生血管區(qū)面積大于對(duì)照組(P<0.001),早產(chǎn)幼鼠22天時(shí)殘留的視網(wǎng)膜血管病變較對(duì)照組更多(P<0.01)。早產(chǎn)幼鼠14、18、22天的視