甲苯磺丁脲等9種CYP探針?biāo)幬矬w內(nèi)肝清除率預(yù)測(cè).pdf

1、多種藥物在個(gè)體和種族間的代謝呈現(xiàn)出顯著差異性，對(duì)于治療指數(shù)比較窄的藥物，若不能預(yù)估其個(gè)體差異，就可能導(dǎo)致嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，甚至死亡。如果一個(gè)藥物在用于臨床之前，其在人群中的安全治療范圍可以預(yù)測(cè)，藥物開發(fā)的效率將會(huì)得到改善。目前體外體內(nèi)外推法（IVIVE，in vitro-in vivo extrapolation)使研究人員有機(jī)會(huì)在研究體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)之前獲得藥物體內(nèi)代謝的定量數(shù)據(jù)。
　　體外體內(nèi)外推法（IVIVE），是用數(shù)學(xué)模型由藥

2、物體外性質(zhì)(藥物溶出的速率或程度)或體外藥動(dòng)學(xué)預(yù)測(cè)其體內(nèi)特性(血藥濃度或藥物吸收量)或體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的方法。由藥物的體外內(nèi)在清除率 Clint,in vitro預(yù)測(cè)體內(nèi)肝清除率（CLh）是 IVIVE的重要研究之一。目前應(yīng)用較多的體外清除率數(shù)據(jù)主要來(lái)源于肝微粒、肝細(xì)胞、肝切片等。肝微粒體的體外內(nèi)在清除率（Clint,in vitro）是體外數(shù)據(jù)的主要來(lái)源之一。
　　隨著研究的不斷深入，IVIVE的研究方法日趨增多，本研究總結(jié)以往的預(yù)測(cè)

3、方法，選擇其中應(yīng)用較廣的三種方法（Obach-fup,Rb法、Berezhkovskiy-fup,app,Rb法與Poulin-fuliver,Rb法）預(yù)測(cè)9種CYP探針?biāo)幬铮–YP1A2探針?lè)悄俏魍?、CYP2A6探針-香豆素、CYP2B6探針-安非他酮、CYP2C8探針-紫杉醇、CYP2C9探針-甲苯磺丁脲、CYP2C19探針-奧美拉唑鈉、CYP2D6探針-右美沙芬、CYP2E1探針-氯唑沙宗、CYP3A探針-咪達(dá)唑侖）的體內(nèi)肝清除率

4、。并采用平均折合誤差（Average-fold error，afe）評(píng)價(jià)藥物體內(nèi)肝清除率預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確度，當(dāng) afe值在0.5-2.0范圍內(nèi)時(shí)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確。
　　本研究還考慮了藥物微粒體蛋白游離率（藥物在微粒體混合體系中的游離率（fum））對(duì)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度 afe的影響，測(cè)定了藥物在本實(shí)驗(yàn)室條件下的 fum值。以評(píng)價(jià)fum對(duì)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度afe的影響。
　　預(yù)測(cè)體內(nèi)肝清除率的參數(shù)主要有每克肝微粒體蛋白的含量（MPPGL）、肝臟重量（LW），

5、肝血流量（Qh）和體重（BW）等五個(gè)參數(shù)，目前體內(nèi)CLh預(yù)測(cè)的研究，普遍采用這些參數(shù)的平均值進(jìn)行預(yù)測(cè)，忽略了參數(shù)個(gè)體值的變異，以致無(wú)法預(yù)知藥物在體內(nèi)代謝的個(gè)體差異。本研究采用五種參數(shù)的個(gè)體值，預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)肝清除率，考察五種參數(shù)個(gè)體值的變異對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果個(gè)體差異的影響。同時(shí)，研究還考慮了預(yù)測(cè)方法對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果個(gè)體差異的影響。以期，為預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)肝清除率的個(gè)體差異提供依據(jù)，為預(yù)測(cè)藥物臨床治療范圍的研究提供參考。
　　方法：
　　1、藥

6、物微粒體蛋白體游離率（fum）的測(cè)定
　　測(cè)定5種探針?biāo)幬锏?fum（紫杉醇與咪達(dá)唑侖因文獻(xiàn)報(bào)道的 fum值，與本實(shí)驗(yàn)室所用的微粒體蛋白濃度一致，研究不再測(cè)定）。首先，在空白體系（不含人肝微粒體）中，采用超濾法測(cè)定藥物在高中低三個(gè)濃度下通過(guò)超濾膜的比率；再在不同濃度的微粒體蛋白體系（非那西汀-0.3mg/ml，香豆素-0.3mg/ml，甲苯磺丁脲-0.5mg/ml，奧美拉唑鈉-0.5mg/ml，右美沙芬-0.2mg/ml）中，測(cè)定

7、高中低三個(gè)濃度的超濾液中游離藥物的濃度；最后，用藥物在空白體系中的通過(guò)率校正計(jì)算得到混合肝微粒體體系中實(shí)際游離藥物的濃度，以計(jì)算藥物的fum值。
　　2、數(shù)據(jù)的收集
　　收集本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的105例樣本的體外內(nèi)在清除率（Clint，in vitro）、每克肝臟微粒體蛋白的含量（MPPGL）、肝臟重量（LW），肝血流量（Qh），體重（BW）/體表面積（BSA）等五種參數(shù)。
　　3、體內(nèi)肝清除率（CLh）的預(yù)測(cè)
　　采

8、用Obach-fup,Rb法、Berezhkovskiy-fup,app,Rb法與Pouli-fuliver,Rb法等三種方法預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)肝清除率CLh，評(píng)估預(yù)測(cè)方法對(duì)藥物體內(nèi)CLh預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度的影響；引入藥物的fum值預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)肝清除率，評(píng)價(jià)其對(duì)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度的影響。
　　4、體內(nèi)CLh個(gè)體差異的預(yù)測(cè)及其影響因素
　　采用Clint in vitro、MPPGL、LW、Qh、BW等五種參數(shù)的個(gè)體值預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)肝清除率，評(píng)

9、價(jià)五種參數(shù)個(gè)體值的差異對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果個(gè)體差異的影響。采用三種預(yù)測(cè)方法預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)CLh的個(gè)體差異，評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)方法對(duì)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度的影響。
　　5、預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性（afe）評(píng)價(jià)
　　預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性是用平均折合誤差afe（Average-fold error）值評(píng)價(jià)。兩倍的預(yù)測(cè)精密度限制是允許的，對(duì)應(yīng)afe值是0.5-2.0。一個(gè)方法預(yù)測(cè)完全準(zhǔn)確的afe值是1。
　　6、統(tǒng)計(jì)方法
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)分析。對(duì)于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采取非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、藥物微粒體蛋白游離率
　　1.1、藥物超濾膜的通過(guò)率
　　空白體系（不含人肝微粒體）中，香豆素、甲苯磺丁脲在三個(gè)濃度的通過(guò)率一致，平均通過(guò)率分別為88.94％、93.86%、79.4%，計(jì)算這三個(gè)藥物的fum值時(shí)，采用平均通過(guò)率進(jìn)行計(jì)算。而右美沙芬在高中低三個(gè)濃度的通過(guò)率不同，且隨

11、濃度增加通過(guò)率與有增加趨勢(shì)，分別為94.45%（320μM）、88.40%（40μM）、80.56%（10μM），非那西汀在高中低的游離率分別為：94.44%（400μM）、95.79%（50μM）、86.97（12.5μM）%，與奧美拉唑鈉79.0%（7.832μM）、76.0%（62.5μM）、83.2%（250μM），因此，計(jì)算非那西汀、右美沙芬與奧美拉唑鈉fum值時(shí)采用其對(duì)應(yīng)濃度的通過(guò)率。
　　1.2、藥物微粒體蛋白游離率

12、（fum）
　　5種探針?biāo)幬锓謩e在其高中低三個(gè)濃度所測(cè)的fum值，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，取三個(gè)濃度的平均值做為該藥物的微粒體蛋白游離率fum。非那西?。?.3mg/ml）、香豆素（0.3mg/ml）、噢美拉唑鈉（0.5mg/ml）、甲苯磺丁脲（0.5mg/ml）、右美沙芬（0.2mg/ml）在對(duì)應(yīng)微粒體蛋白濃度下的fum值分別為：97.22%、94.01%、90.8%、97.66%、93.36%。五種探針?biāo)幬镌谔囟ǖ奈⒘ｓw蛋白濃度體系中

13、的游離率較大，均大于90%。
　　2、預(yù)測(cè)的9種CYP探針?biāo)幬矬w內(nèi)CLh
　　2.1、三種方法預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)肝清除率
　　9種CYP探針?biāo)幬?，安非他酮與氯唑沙宗均是口服制劑，沒(méi)有靜脈給藥的體內(nèi)清除率數(shù)據(jù)，本研究不做其預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。其他7種探針?biāo)幬锊捎肙bach-fup,Rb法甲苯磺丁脲與咪達(dá)唑侖兩個(gè)藥物的預(yù)測(cè)值在體內(nèi)清除率的2倍范圍內(nèi)(其afe值分別為0.57、2.03)，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確； Berezhkovskiy-f

14、up,app,Rb法的預(yù)測(cè)結(jié)果，只有咪達(dá)唑侖預(yù)測(cè)準(zhǔn)確，其afe值為2.03；采用Poulin-fuliver,Rb法預(yù)測(cè)，預(yù)測(cè)結(jié)果均在2倍范圍之外。三種方法，Obach-fup,Rb法預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度較高。
　　2.2、 fum值對(duì)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度的影響
　　三種方法的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度方面，咪達(dá)唑侖（afe值≥2），當(dāng)加入fum值預(yù)測(cè)時(shí)， afe值增大，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度降低；其他6個(gè)藥物（預(yù)測(cè)值低于實(shí)測(cè)值），當(dāng)加入fum值預(yù)測(cè)時(shí)， afe增大，預(yù)測(cè)

15、準(zhǔn)確度增加（甲苯磺丁脲Obach-fup,Rb法雖預(yù)測(cè)準(zhǔn)確（afe值為0.57），但仍屬偏低預(yù)測(cè)）。對(duì)于預(yù)測(cè)不準(zhǔn)確的探針?biāo)幬铮捎胒um值校正后，未達(dá)到預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性的要求，即預(yù)測(cè)結(jié)果在體內(nèi)觀測(cè)值得2倍范圍之外。
　　3、預(yù)測(cè)探針?biāo)幬矬w內(nèi)CLh的個(gè)體差異范圍
　　3.1、五種參數(shù)對(duì)預(yù)測(cè)CLh個(gè)體差異的影響
　　對(duì)于第2部分預(yù)測(cè)準(zhǔn)確的甲苯磺丁脲與咪達(dá)唑侖，兩個(gè)藥物的 CLh的個(gè)體差異分別為49.7倍、21.3倍，其95%PI

16、的差異分別為25.0倍、5.1倍。五種參數(shù)個(gè)體值的差異，對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果個(gè)體差異影響最大的是MPPGL（個(gè)體差異分別為：2.5倍與12.5倍）與Clint,in vitro（個(gè)體差異范圍為：24.2倍，24.7倍），其次是體重、肝重與肝血流量（個(gè)體差異范圍都約在2倍范圍內(nèi)）。其中肝血流量的個(gè)體值差異對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果個(gè)體差異影響最小。
　　3.2、預(yù)測(cè)方法與fum值對(duì)體內(nèi)CLh個(gè)體差異的影響
　　同一方法預(yù)測(cè)9種CYP探針?biāo)幬锏捏w內(nèi)CLh

17、，采用fum值校正后，甲苯磺丁脲與紫杉醇的個(gè)體差異沒(méi)有變化，其他5種探針?biāo)幬镱A(yù)測(cè)結(jié)果的個(gè)體差異倍數(shù)均減小。未加入fum值預(yù)測(cè)時(shí)，不同方法之間，預(yù)測(cè)結(jié)果的個(gè)體差異也不同，除甲苯磺丁脲外，其余探針?biāo)幬矬w內(nèi)CLh個(gè)體差異最大的是Obach-fup,Rb法預(yù)測(cè)的，其次是Berezhkovskiy-fupapp,Rb法，CLh個(gè)體差異最小的是Poulin-fuliver,Rb法。這個(gè)結(jié)果，在加入fum值校正的結(jié)果中，也可以見(jiàn)到。
　　結(jié)論：

18、
　　1.藥物微粒蛋白游離率（fum）較大，藥物體內(nèi)肝清除率預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性不依賴于fum值的校正，但fum值可以改善藥物的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度。
　　2.三種方法預(yù)測(cè)9種探針?biāo)幬顲Lh，Obach-fup,RB法預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度較高，9種CYP探針?biāo)幬镏屑妆交嵌‰迮c咪達(dá)唑侖預(yù)測(cè)準(zhǔn)確。
　　3.甲苯磺丁脲與咪達(dá)唑侖預(yù)測(cè)的體內(nèi)肝清除率CLh個(gè)體差異較大（21.3-49.7倍），預(yù)測(cè)參數(shù)（Clint in vitro、MPPGL、LW、Qh、B