油污土壤降解細菌的分離鑒定及生長條件優(yōu)化.pdf

1、生物修復(fù)(尤其是微生物)技術(shù)治理石油污染土壤的方法以其費用低、無二次污染等優(yōu)點被廣泛關(guān)注。目前,微生物修復(fù)石油污染已經(jīng)在實驗室條件下展開,為生物修復(fù)技術(shù)在實踐中的應(yīng)用提供了參考和指導(dǎo)。本研究從大慶油田長期被石油污染的土壤中采集土壤樣品,以原油為唯一碳源篩通過直接分離法選出一組石油烴降解優(yōu)勢菌:選擇其中十株純種菌作為研究對象,利用16SrDNA全序列分析結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和部分生理生化試驗對高效的石油降解菌株進行初步的鑒定并對其最佳的生長條件

2、進行了摸索(pH值、鹽濃度,營養(yǎng)物質(zhì)),研究了不同影響因素對微生物生長的影響程度及最佳的水平組合；最后在實驗室條件下,對石油污染土壤的土壤酶活性驚醒測定。研究結(jié)果如下:
　　 1、通過對7個石油污染土壤樣品的富集培養(yǎng),挑選出10株長勢較好的細菌。分別命名為15,18,7,9,11,21,L,H,X,4。
　　 2、通過形態(tài)學(xué)觀察,部分生理生化分析和16SrDNA全序列分析相結(jié)合,初步確定11菌株鑒定為短小芽孢桿菌(Bac

3、illus pumilus),15菌株為根瘤菌屬(Rhizobium sp),18菌株為氧化微桿菌氧化微桿菌屬(Licrobacterium oxydans),H為節(jié)細菌屬(Arthrobacter sp),7、9、4、21、L、X菌株均為芽孢桿菌屬(Bacillus sp)。若想將各菌株鑒定到種,還有待進一步研究。
　　 3、(1)單因素法改變初始pH值,鹽濃度,N源和P源初步探尋各菌株的最適生長條件,結(jié)果發(fā)現(xiàn):L菌株的最適生

4、長條件為pH=7,鹽濃度1％,氮源和磷源分別為NH4NO3和NaH2PO4。H菌株的最適生長條件:pH=7,鹽濃度3％,氮源和磷源分別為KNO3和K2HPO4:KH2PO4為1:2(雙磷源)。18菌株最適pH為8,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4NO3和K2HPO4。15菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和雙磷源。4菌株最適pH為8,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4NO3和KH2PO4。X菌株最適pH為7

5、,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和雙磷源。11菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和KH2PO4。7菌株最適pH為6,鹽濃度為1％,氮源和磷源分別為KNO3和雙磷源。9菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4C1和雙磷源。21菌株最適pH為7,鹽濃度為1％,氮源和磷源分別為NH4Cl和K2HPO4。
　　 (2)正交試驗是為了探究各種影響因素對菌株生長的影響程度,以尋求適合菌株生長的

6、最優(yōu)條件組合。結(jié)果顯示各菌株的最優(yōu)條件組合分別為:L菌株是182A384D,H菌株是182A384D,18菌株是1B483A2C,15菌株是2B1B4C3A,4菌株是283A184A,X菌株是1A3D284D,7菌株182C3D4A,9菌株是1A2A3A4A,21菌株是1838284B/C,11菌株是1.A2A3A4A。
　　 4、石油污染土壤酶活性的測定結(jié)果:
　　 (1)多酚氧化酶酶活性分別為(mg/g):61深35

7、.78851,61中25.28901,61表22.87682,97深49.79176,97表32.4608,97中32.84066,油土30.55726。
　　 (2)土壤脲酶活性分別是(mg/g):61深0.276984,61表0.904971,61中0.321074,97深0.053245,97表0.320985,97中0.296232,油土0.247786。
　　 (3)土壤轉(zhuǎn)化酶活性分別是(mg/g):61深0.