油污土壤降解細(xì)菌的分離鑒定及生長(zhǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、生物修復(fù)(尤其是微生物)技術(shù)治理石油污染土壤的方法以其費(fèi)用低、無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn)被廣泛關(guān)注。目前,微生物修復(fù)石油污染已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室條件下展開,為生物修復(fù)技術(shù)在實(shí)踐中的應(yīng)用提供了參考和指導(dǎo)。本研究從大慶油田長(zhǎng)期被石油污染的土壤中采集土壤樣品,以原油為唯一碳源篩通過直接分離法選出一組石油烴降解優(yōu)勢(shì)菌:選擇其中十株純種菌作為研究對(duì)象,利用16SrDNA全序列分析結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和部分生理生化試驗(yàn)對(duì)高效的石油降解菌株進(jìn)行初步的鑒定并對(duì)其最佳的生長(zhǎng)條件

2、進(jìn)行了摸索(pH值、鹽濃度,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)),研究了不同影響因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響程度及最佳的水平組合；最后在實(shí)驗(yàn)室條件下,對(duì)石油污染土壤的土壤酶活性驚醒測(cè)定。研究結(jié)果如下:
　　 1、通過對(duì)7個(gè)石油污染土壤樣品的富集培養(yǎng),挑選出10株長(zhǎng)勢(shì)較好的細(xì)菌。分別命名為15,18,7,9,11,21,L,H,X,4。
　　 2、通過形態(tài)學(xué)觀察,部分生理生化分析和16SrDNA全序列分析相結(jié)合,初步確定11菌株鑒定為短小芽孢桿菌(Bac

3、illus pumilus),15菌株為根瘤菌屬(Rhizobium sp),18菌株為氧化微桿菌氧化微桿菌屬(Licrobacterium oxydans),H為節(jié)細(xì)菌屬(Arthrobacter sp),7、9、4、21、L、X菌株均為芽孢桿菌屬(Bacillus sp)。若想將各菌株鑒定到種,還有待進(jìn)一步研究。
　　 3、(1)單因素法改變初始pH值,鹽濃度,N源和P源初步探尋各菌株的最適生長(zhǎng)條件,結(jié)果發(fā)現(xiàn):L菌株的最適生

4、長(zhǎng)條件為pH=7,鹽濃度1％,氮源和磷源分別為NH4NO3和NaH2PO4。H菌株的最適生長(zhǎng)條件:pH=7,鹽濃度3％,氮源和磷源分別為KNO3和K2HPO4:KH2PO4為1:2(雙磷源)。18菌株最適pH為8,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4NO3和K2HPO4。15菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和雙磷源。4菌株最適pH為8,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4NO3和KH2PO4。X菌株最適pH為7

5、,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和雙磷源。11菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4Cl和KH2PO4。7菌株最適pH為6,鹽濃度為1％,氮源和磷源分別為KNO3和雙磷源。9菌株最適pH為7,鹽濃度為3％,氮源和磷源分別為NH4C1和雙磷源。21菌株最適pH為7,鹽濃度為1％,氮源和磷源分別為NH4Cl和K2HPO4。
　　 (2)正交試驗(yàn)是為了探究各種影響因素對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響程度,以尋求適合菌株生長(zhǎng)的

6、最優(yōu)條件組合。結(jié)果顯示各菌株的最優(yōu)條件組合分別為:L菌株是182A384D,H菌株是182A384D,18菌株是1B483A2C,15菌株是2B1B4C3A,4菌株是283A184A,X菌株是1A3D284D,7菌株182C3D4A,9菌株是1A2A3A4A,21菌株是1838284B/C,11菌株是1.A2A3A4A。
　　 4、石油污染土壤酶活性的測(cè)定結(jié)果:
　　 (1)多酚氧化酶酶活性分別為(mg/g):61深35

7、.78851,61中25.28901,61表22.87682,97深49.79176,97表32.4608,97中32.84066,油土30.55726。
　　 (2)土壤脲酶活性分別是(mg/g):61深0.276984,61表0.904971,61中0.321074,97深0.053245,97表0.320985,97中0.296232,油土0.247786。
　　 (3)土壤轉(zhuǎn)化酶活性分別是(mg/g):61深0.