石油降解細(xì)菌的分離、篩選、鑒定及其對多環(huán)芳烴降解性能研究.pdf

1、本研究從盤錦“紅海灘”地區(qū)采集翅堿蓬及根系土壤，進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌分離，并采用柴油為唯一碳源的培養(yǎng)基從中篩選具有降油性能的菌株；對篩選到的菌株進(jìn)行降油性能測定，研究其在不同作用時間（3d、5d、7d）內(nèi)對柴油的原始降解率；選擇在3個時間段降油性能均較高的菌株作為目的菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生理生化鑒定以及16S rDNA序列分析并測定其生長特性；選取降油效果較好的2株代表菌，以及實(shí)驗(yàn)室前期從遼寧盤錦沿海灘涂土壤分離的惡臭假單胞菌（Pseudomon

2、as putida）Y3菌株，采用GC-MS法測定3株菌在添加不同濃度葡萄糖（0、0.5、1、1.5 g/L）作用7d后對萘、菲、惹烯、苯并[α]芘4種多環(huán)芳烴的降解性能；對3株菌的石油降解酶相關(guān)功能基因進(jìn)行了擴(kuò)增：結(jié)果顯示：共分離純化到28株細(xì)菌，其中具有降油性能的細(xì)菌7株，編號分別為 S1、G3、G4、G9、G10、G11、G12；7株菌對柴油的原始降解率如下，3d分別為34.21％、3.68%、18.40%、18.95%、0.52

3、%、9.47%、21.05%；5d分別為44.06%、3.19%、23.90%、24.70%、31.47%、25.90%、46.22%；7d分別為41.09%、1.49%、14.36%、28.22%、14.36%、29.70%、31.68%，其中S1、G11和G12菌株具有較高降油率；經(jīng)鑒定S1菌株為微桿菌屬（Microbacterium），與Microbacterium saperdate的同源性為98.7%；G11和 G12皆屬于劉

4、志恒菌屬（Zhihengliuella），與Zhihengliuella halotolerans的同源性為99.8%，3株菌最適生長溫度范圍皆為15℃～30℃，最適生長NaCl濃度分別為0%、2%和2%，最適pH分別為pH5、pH7和pH7；在4種多環(huán)芳烴（萘、菲、惹烯、苯并[α]芘）無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，自然降解率分別為5.49%、8.57%、7.52%、6.84%，在添加不同濃度的葡萄糖后，分別接種3株菌作用7d，對4種目標(biāo)化合物的降解

5、率均有不同程度的增加，其中對萘的降解率表現(xiàn)為，3株菌在無糖情況下的降解率差異不顯著（P>0.05），1%濃度葡萄糖組降解率最高，Y3、G12、S1分別為70.56%、67.82%、57.46%，3株菌無顯著性差異；對菲的降解情況為，1.5%濃度葡萄糖時3株菌降解效果在所有組中最高，與無糖組和0.5%糖濃度組差異顯著（P<0.05），與1%濃度組差異不顯著（P>0.05），3株菌間降解率差異不顯著（P>0.05）， Y3具有最高降解率，達(dá)

6、到63.20%，其次為S160.90%，G1260.33%；對惹烯的降解率為，無糖對照組，G12最高達(dá)到10.22%，其次為Y3和 S1，降解率分別為：5.18%、0.05%，差異顯著（P<0.05），各濃度組以1%葡萄糖時降解性能最佳，與無糖組和0.5%濃度組差異顯著，與1.5%濃度組差異不顯著， Y3降解率最高達(dá)到66.49%，其次為G1266.42%、S166.18%，3株菌間降解率差異不明顯（P>0.05）；對苯并[α]芘的降解

7、情況為，葡萄糖添加量1%時，3株菌的降解能力最強(qiáng)，與無糖組和0.5%糖濃度組差異極顯著（P<0.01），與1.5%濃度組差異不顯著（P>0.05），Y3降解率最高達(dá)到71.43%，其次為S171.91%，G1270.50%，略低于S1；3株菌降解率仍無明顯差異（P>0.05）。僅從S1菌株基因組上擴(kuò)增得到了大小為691bp的烷烴羥化酶基因 alkB部分的DNA片段，經(jīng)NCBI blastx比對，結(jié)果與 Rhodococcus qings