斑馬魚尾鰭再生中相關基因的表達及血根堿對其再生過程的影響.pdf

1、單位代碼10476學號1504183004。分類號Q38IIllUIIIIIIIIIIIIII』一丫3437051河南衙軸大穿河南衙軸大學碩士學位論文斑馬魚尾鰭再生中相關基因的表達及血根堿對其再生過程。，的影晌，學科、專業(yè)研究方向申請學位類別申請人指導教師：生物學遺傳學：動物分子遺一傳學I理學碩士，：資靜雅’一：李莉副教授二。一八年五月摘要再生，即發(fā)育成熟的個體，受到機械或自然傷害后的組織，仍然存在在原有基礎上發(fā)育成完整個體的能力。與哺

2、乳動物相反的是，硬骨魚魚鰭組織在剪鰭后具有很強的再生潛能，其尾鰭再生過程是研究組織再生分子基礎的一個重要模型。最近，斑馬魚作為組織或器官遺傳學研究的模式脊椎動物而出現，對傷害的反應，斑馬魚主要的鰭結構再生的非?？?，在剪鰭或損傷后，由各種再生相關基因表達引起級聯(lián)反應，使得丟失尾鰭結構仍然能夠恢復到原來的大小。因為基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)與細胞外基質(extracellularmatrix

3、，ECM)的降解和重塑有關，能夠影響細胞遷移，是細胞外基質在健康、疾病、發(fā)育、再生過程中周轉的關鍵酶。所以，我們又對romp9和rompl3這兩個基因進行生物信息學分析，在NCBIGeneBank中，查找到mmp9cDNA序列全長2801bp，其中102bp的57UTR區(qū)和656bp的37UTR區(qū)，ORF長2043bp，編碼680個氨基酸序列，相對分子質量是7658927Da，等電點pI為563。對蛋白的二級結構分析發(fā)現0l螺旋有145

4、個，占2132％，B轉角有77個，占1132％，無規(guī)則卷曲線圈有309個，占4544％mmpl3cDNA序列全長1653bp。其中12bp的57UTR區(qū)和213bp的37UTR區(qū)，ORF長1428bp，編碼475個氨基酸序列。相對分子質量是5379201Da，等電點pI是597，對蛋白的二級結構分析發(fā)現0l螺旋111個，占2337％，B轉角44個，占926％，無規(guī)則卷曲線圈有199個，古4189％。對mmp9和mmpl3基因進行qPCR

5、，發(fā)現在剪鰭后，這兩個基因表達量都顯著性增加。運用原位雜交技術，對再生不同時期的斑馬魚尾鰭做冰凍切片，采用預先制備好的romp9和mmpl3基因正義和反義RNA探針進行雜交，結果發(fā)現：再生斑馬魚尾鰭中，romp9在剪鰭后再生第3天(3dpa)在骨骼前體細胞中表達，mmpl3在3dpa芽基中表達信號最強，4dpa時，表達信號減弱。另外，在GeneBank中查找另外13個再生相關基因的cDNA全長序列，根據全長序列設計熒光定量PCR特異引物