糖尿病患者外周血細(xì)胞組蛋白修飾研究.pdf

1、第一部分2型糖尿病患者PBMC組蛋白修飾研究。
　　 目的：探討2型糖尿病(T2DM)患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)整體組蛋白修飾情況及PBMC腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)基因啟動子區(qū)域組蛋白乙?；闆r。
　　 方法：收集12例T2DM患者及12例健康對照PBMC，H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙?；瘷z測試劑盒提取組蛋白和檢測H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙?；?。實時多聚酶

2、鏈反應(yīng)(Real time-PCR)法檢測T2DM PBMC組蛋白修飾酶譜、TNF-α mRNA、COX-2 mRNA表達(dá)水平。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測TNF-α及COX-2基因啟動子區(qū)域組蛋白H3乙?；癄顟B(tài)。
　　 結(jié)果：與健康對照組比較，T2DM患者PBMC組蛋白H3K4甲基化水平升高(P<0.05)、H3乙?；缴?P<0.01)、H4乙酰化水平升高(P<0.05)。Real time-PCR結(jié)果顯示T2DM患者PBMC

3、組蛋白去乙?；窰DAC2、SIRT1 mRNA表達(dá)分別是健康對照組的3.55±0.30(P<0.01)、0.40±0.25倍(P<0.05)；組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶P300、CREBBP mRNA表達(dá)分別是健康對照組的3.11±0.38(P<0.05)、2.78±0.45(P<0.05)倍；組蛋白去甲基化酶KDM3A、KDM5B和LSD1 mRNA表達(dá)分別是健康對照組的0.43±0.43(P<0.05)、3.55±0.30(P<0.01)和

4、0.36±0.35(P<0.05)倍；組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET1mRNA表達(dá)是健康對照組的3.06±0.51倍(P<0.05)。與正常對照組比較，T2DM患者PBMC TNF-α及COX-2 mRNA表達(dá)增高，TNF-α及COX-2基因啟動子區(qū)域組蛋白H3呈高乙酰化狀態(tài)。
　　 結(jié)論：2型糖尿病PBMC整體組蛋白修飾及組蛋白修飾酶譜異常，TNF-α及COX-2基因啟動子區(qū)域組蛋白H3高乙酰化。
　　 第二部分成人隱匿性自身

5、免疫糖尿病CD4+T細(xì)胞組蛋白修飾研究。
　　 目的：探討成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者外周血CD4+T細(xì)胞整體組蛋白修飾及CD4+T細(xì)胞叉頭框蛋白3(Foxp3)基因啟動子區(qū)域組蛋白乙?；闆r。
　　 方法：收集16例LADA患者及16例健康對照外周血單個核細(xì)胞，磁珠分選CD4+T細(xì)胞，H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙酰化檢測試劑盒提取組蛋白和檢測H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙?；?。Real

6、time-PCR法檢測CD4+T組蛋白修飾酶譜及Foxp3 mRNA表達(dá)水平。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測Foxp3基因啟動子區(qū)域組蛋白H3乙?；癄顟B(tài)。
　　 結(jié)果：與健康對照組比較，LADA患者CD4+T細(xì)胞組蛋白H3/H4乙?；浇档?P<0.05)。Real Time-PCR結(jié)果顯示LADA患者組CD4+T細(xì)胞組蛋白去乙酰化酶HDAC2、HDAC5、SIRT1 mRNA表達(dá)上調(diào)；組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶P300、CREBBP、PCAF

7、 mRNA表達(dá)下調(diào)；組蛋白去甲基化酶LSD1 mRNA表達(dá)是健康對照組的0.17±0.13(P<0.01)倍；組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SUV39H2 mRNA表達(dá)是健康對照組的0.36±0.11(P<0.05)倍。LADA患者外周血CD4+T細(xì)胞Foxp3mRNA表達(dá)較正常對照組降低(P<0.05)，F(xiàn)oxp3基因啟動子區(qū)域(-501/-416)(-204/-114)組蛋白H3乙?；浇档?P<0.01)。
　　 結(jié)論：LADA患者C

8、D4+T細(xì)胞整體組蛋白修飾及組蛋白修飾酶譜異常，F(xiàn)oxp3基因啟動子區(qū)域(-501/-416)(-204/-114)組蛋白H3低乙?；?。
　　 第三部分曲古抑菌素A增加LADA患者CD4+T細(xì)胞H3乙酰化及Foxp3表達(dá)。
　　 目的：探討組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A(TSA)干預(yù)對LADA患者CD4+T細(xì)胞乙?；郊癋oxp3表達(dá)的影響。
　　 方法：采用密度梯度離心法分離LADA患者外周血單個核細(xì)胞，