微波輔助-多相溶劑體系萃取分離農(nóng)吉利中有效成分的研究.pdf

1、農(nóng)吉利（Crotalaria sessiliflora L.）是豬屎豆屬植物野百合的干燥全草，具有利濕、清熱、解毒的功能。在我國廣泛應(yīng)用在多種疾病如耳聾，耳鳴，頭目暈眩及各種癌癥如食管癌、宮頸癌、皮膚癌等的治療。農(nóng)吉利中主要含有生物堿和黃酮等有效成分。傳統(tǒng)的提取分離方法如熱回流提取，冷浸提取等，不僅大量的使用有機(jī)溶劑，破壞環(huán)境，并且耗費(fèi)時(shí)間，效率低下。本文采用多相溶劑萃取技術(shù)對(duì)農(nóng)吉利中的有效成分進(jìn)行萃取，考察了多相溶劑萃取體系的性質(zhì)并對(duì)

2、影響萃取的因素進(jìn)行了探討，此外利用多相溶劑萃取技術(shù)與微波輔助萃取技術(shù)相結(jié)合，系統(tǒng)的研究了在微波作用下各種因素的影響，最后優(yōu)化了農(nóng)吉利中生物堿和黃酮化合物萃取的條件，利用多相溶劑萃取體系相似相容的性質(zhì)，初步使生物堿類成分和黃酮類成分得到了分離，主要研究內(nèi)容與研究結(jié)果如下：
　　1、采用反相液相色譜法，分別建立了農(nóng)吉利中黃酮類成分牡荊素、異牡荊素以及生物堿類成分野百合堿的HPLC色譜分析方法。以乙腈–0.5％磷酸（14：86）為流動(dòng)相

3、，在波長340nm處進(jìn)行檢測(cè)，牡荊素和異牡荊素色譜峰的理論板數(shù)均在10000以上。牡荊素和異牡荊素的保留時(shí)間分別為30.66 min和34.77min，在0.2080~20.08mg.L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，加標(biāo)回收率在98%~105.5%之間。以甲醇–0.1%氨水（30：70）為流動(dòng)相，在波長220nm處進(jìn)行檢測(cè)，野百合堿的保留時(shí)間為11.13min，在1.092~109.2 mg.L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，加標(biāo)回收率在97

4、.55~101.54%之間。將此方法用于微波提取農(nóng)吉利中的牡荊素、異牡荊素和野百合堿的測(cè)定，方法可靠。
　　2、采用乙醇/(NH4)2SO4雙水相體系作為萃取溶劑，結(jié)合密閉微波輔助萃?。≒MAE）技術(shù)，研究了微波輔助雙水相萃取農(nóng)吉利中的牡荊素和異牡荊素萃取分離性能，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上應(yīng)用響應(yīng)面分析方法優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件。獲得最佳萃取條件為：乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)32%，(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)22%，液料比50：1，萃取時(shí)間8 min，萃取

5、溫度80℃；在此條件下牡荊素和異牡荊素的收率為243.39μg/g和162.09μg/g，與預(yù)測(cè)值242.08μg/g和164.5μg/g相接近。表明響應(yīng)面分析方法的模型選擇合適，可以用來確定最佳萃取試驗(yàn)條件。
　　3、選擇不同的非離子表面活性劑來構(gòu)建濁點(diǎn)體系，研究了各體系的濁點(diǎn)溫度、性質(zhì)和萃取性能。結(jié)果表明：Triton X-100和Tween-80都能形成穩(wěn)定的濁點(diǎn)體系，其中Triton X-100的濁點(diǎn)溫度低于Tween-8

6、0，并且萃取率較Tween-80大，其萃取最佳條件：牡荊素和異牡荊素的最佳萃取條件為Triton X-100濃度2%，平衡溫度63℃，平衡時(shí)間30min，鹽酸濃度0.05mol/L；而野百合堿的最佳萃取條件為Triton X-100濃度為2%，平衡溫度68℃，平衡時(shí)間30 min，鹽酸濃度0.1 mol/L。牡荊素、異牡荊素和野百合堿的萃取率可達(dá)77.61%、75.36%和79.6%。將微波萃取技術(shù)與濁點(diǎn)萃取技術(shù)結(jié)合，采用Triton

7、X-100水溶液為萃取溶劑，在密閉微波輔助下直接從農(nóng)吉利藥材中提取有效成分。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)對(duì)影響較大的因素進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化，結(jié)果表明：牡荊素和異牡荊素的萃取方案以Triton X-100濃度5%，萃取溫度90℃，液料比100：1，萃取時(shí)間10 min為最佳。野百合堿的萃取方案以Triton X-100濃度3%，萃取溫度80℃，液料比100：1，萃取時(shí)間10min為最佳。分別按最優(yōu)萃取條件進(jìn)行試驗(yàn)，牡荊素的收率可達(dá)6

8、01.37μg/g，異牡荊素可達(dá)386.7μg/g，野百合堿的收率可達(dá)105.48μg/g。并且在此過程中，黃酮類化合物和生物堿類化合物可以被分配到不同的相面中。
　　4、在雙水相體系的基礎(chǔ)上，選用合適的有機(jī)溶劑來構(gòu)建三相溶劑體系，考察了乙醇/(NH4)2SO4/氯仿、石油醚、乙酸乙酯和PEG/(NH4)2SO4/氯仿、乙酸乙酯的成相性質(zhì)，并對(duì)不同分子量 PEG形成三相溶劑體系的性質(zhì)和萃取率進(jìn)行了考察，最終選用PEG2000/(N

9、H4)2SO4/乙酸乙酯的三相溶劑體系來對(duì)農(nóng)吉利中的有效成分進(jìn)行提取。實(shí)驗(yàn)考察了不同因素對(duì)農(nóng)吉利有效成分萃取的影響，利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)該萃取過程進(jìn)行優(yōu)化。最后結(jié)果為：牡荊素和異牡荊素的萃取方案以PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%，(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%，萃取溫度90℃，液料比90：1，萃取時(shí)間15 min；野百合堿的萃取方案以PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)14%，(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%，萃取溫度80℃，液料比90：1，萃取時(shí)間20 m

10、in為佳。采用不同方法對(duì)農(nóng)吉利中牡荊素、異牡荊素和野百合堿進(jìn)行了萃取，并以該三種有效成分的收率為目標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)微波輔助三相萃取具有最高的萃取率；微波輔助萃取三相可以初步的分離農(nóng)吉利中的黃酮類和生物堿類有效成分，并且操作簡單。
　　5、對(duì)雙水相萃取、濁點(diǎn)萃取和三相溶劑體系萃取農(nóng)吉利中有效成分的熱力學(xué)過程進(jìn)行了討論，并且對(duì)熱力學(xué)方程進(jìn)行了線性擬合。結(jié)果表明，在雙水相萃取、濁點(diǎn)萃取和三相萃取過程中，牡荊素、異牡荊素和野百合堿的焓