大孔吸附樹脂對虎杖中有效成分的分離純化研究.pdf

1、虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是我國的傳統(tǒng)中藥材之一，2000年版的《中國藥典》中被收錄于第一部?；⒄戎械纳锘钚猿煞钟熊晤惢衔锖忘S酮類化合物等，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，芪類成分中白藜蘆醇(Resveratrol)的生理活性主要表現(xiàn)在抗氧化、抗自由基、抗衰老、抗癌、抗心血管疾病等方面；黃酮類化合物(Flavonoids)具有鎮(zhèn)痛、抗病毒、降血脂、降血糖、抗氧化等多種醫(yī)用功效。目前，從虎杖中分離

2、純化其中有效成分的研究越來越受到人們的關(guān)注。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用酶解法提取虎杖中的白藜蘆醇，通過單因素和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到白藜蘆醇最優(yōu)提取工藝條件如下：提取溫度為45℃，提取時(shí)間為5.0 h，酶用量0.50%（m/m），提取液 pH為6.5，白藜蘆醇提取率為75.66%，含量為3.80%，較原料藥中的含量（0.4%）提高了約10倍。⑵考察了32種MAR及其混合床(MARs)對虎杖粗提物中白藜蘆醇的純化效果，結(jié)果表明，

3、MARs LZ-94+LZ-78+LZ-76對白藜蘆醇的純化效果最好，優(yōu)化得出最佳吸附條件為：吸附液濃度為0.25mg/mL、吸附溫度45℃、吸附液體積60.0 mL、吸附液pH=3.0、吸附時(shí)間9.0 h；最佳解吸條件為：解吸溫度55℃、解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，解吸時(shí)間2.5h，解吸液pH=4.0。得出MARs對白藜蘆醇的吸附率97.96%，解吸率80.55%，最終白藜蘆醇回收率達(dá)到78.60%，純度達(dá)到19.32%，是白藜蘆醇粗提

4、物的5.08倍。MARs對白藜蘆醇的吸附動(dòng)力學(xué)研究表明MARs對白藜蘆醇的的吸附過程符合準(zhǔn)二級動(dòng)力學(xué)模型，大孔區(qū)和中孔區(qū)的吸附過程均符合 Intra-particle-diffusion模型，預(yù)示著吸附過程由粒內(nèi)擴(kuò)散過程控制，微孔區(qū)中的吸附過程由Homogeneous particle-diffusion模型控制；Freundlich模型更適合描述MARs對白藜蘆醇的熱力學(xué)吸附行為，說明MARs對虎杖中白藜蘆醇的吸附行為為多分子層物理吸

5、附。⑶由于在前部分對虎杖中的白藜蘆醇分離純化后，純度較低，所以本部分采用虎杖粗提物預(yù)處理法輔助MARs對白藜蘆醇進(jìn)行分離純化。首先研究了萃取方法和工藝，通過比較不同有機(jī)溶劑及混合溶劑對白藜蘆醇的萃取效果，得出以有機(jī)溶劑 E/D=3/1為萃取劑時(shí)對白藜蘆醇萃取效果較好，萃取水相與有機(jī)相最佳體積比Vw/Vo=2/3、萃取時(shí)間間隔為60min、萃取5次最為適宜。該條件下，白藜蘆醇萃取率為88.81%，純度為66.50%。該萃取方法能夠在保證白

6、藜蘆醇苷被充分水解成白藜蘆醇的前提下，保證白藜蘆醇最少量的分解損失，且由于E和 D均是國際化學(xué)界公認(rèn)的綠色溶劑，環(huán)境友好。之后，將萃取后所得樣品分別采用硅膠柱層析技術(shù)和MARs技術(shù)進(jìn)行分離純化，比較了兩種分離純化方法，發(fā)現(xiàn)經(jīng)硅膠柱層析法分離純化后白藜蘆醇的回收率為61.60%，純度為73.70%，經(jīng) MARs技術(shù)純化白藜蘆醇后白藜蘆醇的回收率為81.10%，純度為87.12%。因此在純化相同質(zhì)量白藜蘆醇的前提下，MARs純化技術(shù)優(yōu)于硅膠

7、柱層析法。⑷采用超聲輔助法提取虎杖中黃酮類化合物，通過單因素實(shí)驗(yàn)和中心組合設(shè)計(jì)以及響應(yīng)面法優(yōu)化黃酮類化合物的提取工藝，得出最優(yōu)提取條件如下：提取液乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，提取溫度45℃、超聲提取時(shí)間34 min、超聲功率80W、固液比1/20(g/mL)、最佳提取次數(shù)為5次，該條件下虎杖中黃酮類化合物的提取率達(dá)到94.50%，其初始提取物的純度為31.00%。⑸考察32種MAR及MARs對虎杖中黃酮類化合物的分離純化效果，結(jié)果得出單一 M

8、AR LZ-72對虎杖中黃酮類化合物的分離純化效果最佳，最佳吸附條件為：吸附原液濃度為2.50mg/mL，吸附溫度30℃，吸附液為10%的乙醇溶液、吸附液體積60.0 mL、吸附時(shí)間20 h；最佳解吸條件為：解吸溫度55℃、解吸液體積為110 mL，解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%，解吸附時(shí)間為20 h，最終產(chǎn)物純度達(dá)到82.50%，回收率達(dá)到89.70%。LZ-72對黃酮類化合物的吸附動(dòng)力學(xué)研究表明該吸附過程符合準(zhǔn)二級動(dòng)力學(xué)模型，大孔區(qū)和中