低濃度砷染毒對(duì)大鼠紅細(xì)胞的損傷及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：1.分析比較低濃度砷染毒大鼠紅細(xì)胞和紅細(xì)胞膜蛋白的毒性改變，尋找慢性砷中毒早期生物標(biāo)志物；2. 研究低濃度砷染毒大鼠紅細(xì)胞膜蛋白損傷分子機(jī)制，為砷的毒作用機(jī)制研究開(kāi)辟新思路；3. 建立低濃度飲用水砷暴露動(dòng)物模型，測(cè)定其毒效應(yīng)，為國(guó)家飲用水砷衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。
　　 方法：140g-160g 健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組，10μg/L、60μg/L、360μg/L 砷染毒組；3個(gè)染毒組采用自

2、由飲用含砷水染毒，對(duì)照組飲用普通潔凈自來(lái)水；染毒30天后，麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)脈采集血樣，解剖取其主要臟器。分析比較不同組大鼠體重、臟器系數(shù)等一般毒性指標(biāo)。檢測(cè)不同組大鼠紅細(xì)胞參數(shù)、紅細(xì)胞衰亡率、紅細(xì)胞形態(tài)及紅細(xì)胞聚集能力和變形能力等紅細(xì)胞毒性損傷指標(biāo)。采用SDS-PAGE 電泳和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)分析比較其紅細(xì)胞膜蛋白變化。
　　 結(jié)果：1.大鼠一般毒性不同組大鼠同一時(shí)間體重差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對(duì)照組相比，360μg

3、/L 砷染毒組大鼠脾臟臟器系數(shù)明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；其余腦、心、肺、肝、腎臟器系數(shù)各組之間尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。2.大鼠紅細(xì)胞毒性2.1紅細(xì)胞參數(shù)：與正常對(duì)照組相比，各染毒組大鼠紅細(xì)胞參數(shù)尚未發(fā)生異常改變（P>0.05）。2.2 紅細(xì)胞衰亡率：流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，360μg/L 砷染毒組大鼠紅細(xì)胞衰亡率增加（P<0.05）。2.3 紅細(xì)胞形態(tài)：砷染毒組大鼠紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常改變，細(xì)胞表面

4、出現(xiàn)微小突起或明顯棘突等不規(guī)則變化，360μg/L 砷染毒組的變化最為明顯，可見(jiàn)多個(gè)不規(guī)則形紅細(xì)胞以及明顯棘突狀紅細(xì)胞。2.4 紅細(xì)胞血液流變學(xué)：與對(duì)照組相比，360μg/L 砷染毒組的全血低切表觀粘度、相對(duì)粘度和還原粘度均明顯降低（P<0.05）；360μg/L 砷染毒組全血中切表觀粘度的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；同時(shí)，360μg/L 砷染毒組的紅細(xì)胞聚集指數(shù)也明顯小于對(duì)照組（P<0.01）；而不同組全血高切表觀粘度、相對(duì)粘度

5、和還原粘度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)改變（P>0.05），紅細(xì)胞剛性指數(shù)和變形指數(shù)也無(wú)明顯變化（P>0.05）。3.大鼠紅細(xì)胞膜蛋白損傷SDS-PAGE 電泳分離得到α-血影蛋白、β-血影蛋白、錨蛋白、帶3蛋白、帶4.2蛋白、肌動(dòng)蛋白，共6種主要大鼠紅細(xì)胞蛋白。與對(duì)照組相比，360μg/L 砷染毒組大鼠錨蛋白含量減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。隨染毒劑量增加，各組大鼠帶3蛋白表達(dá)呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，且360μg/L 砷染毒組的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

6、05）。其余4種蛋白表達(dá)水平的改變均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，帶3蛋白和CD35在砷暴露大鼠紅細(xì)胞膜上呈現(xiàn)簇集性增加，以60μg/L和360μg/L 砷染毒組較為明顯。
　　 結(jié)論：1. 低濃度砷染毒可對(duì)大鼠紅細(xì)胞產(chǎn)生毒作用，導(dǎo)致紅細(xì)胞衰亡率（eryptosis）增加、紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常改變、紅細(xì)胞聚集性降低，其原因可能與砷致紅細(xì)胞膜帶3蛋白和錨蛋白含量異常及紅細(xì)胞膜上帶3蛋白和CD35簇集性增加有關(guān)。