辛基酚致大鼠睪丸Sertoli細胞損傷及其機制的研究.pdf

1、笫一部分辛基酚對大鼠睪丸Sertoli細胞凋亡的影響 為探討OP對大鼠睪丸Sertoli細胞的凋亡作用及其機制，選取青春期雄性SD大鼠(25-30d)，在建立睪丸Sertoli細胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以30-60μM濃度的OP作用于Sertoli細胞24小時或60μMOP作用于Sertoli細胞6-24小時。采用透射電鏡、流式細胞儀和Hoechst染色法檢測細胞凋亡及凋亡的發(fā)生率。主要結(jié)果如下： 1.電鏡下，對照組

2、Sertoli細胞體積較大，胞質(zhì)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，線粒體和溶酶體常見，細胞核不規(guī)則，有核裂，單染色質(zhì)豐富，核仁明顯，有時可以看到1-2個衛(wèi)星核小體；OP處理組可見大量的、各期的凋亡細胞，表現(xiàn)為細胞核染色質(zhì)凝集、邊集，細胞出現(xiàn)核碎裂，胞質(zhì)出芽等現(xiàn)象以及形成典型的凋亡小體，但細胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整。 2.TUNEL分析的結(jié)果顯示，不同濃度OP處理Sertoli細胞24h后，凋亡細胞的百分率隨OP濃度的增加而增加。 3.經(jīng)Hoec

3、hst染色，對照組Sertoli細胞核大小較均一，染色質(zhì)分布均勻，紫外光下呈藍色熒光，偶見核縮小和染色質(zhì)濃縮的Sertoli細胞；60μM的OP處理6-24h后，Sertoli細胞出現(xiàn)了不同程度的細胞核皺縮、變形，核染亮藍色，染色質(zhì)濃縮，呈均勻的致密斑塊或碎片狀，有凋亡小體出現(xiàn)。 4.不同濃度OP染毒24h后，Bcl-2mRNA表達水平隨染毒濃度的增加呈下降趨勢，且50和60μMOP處理組表達水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.

4、0¨，而BaxmRNA表達水平在50和60μMOP處理組則顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)；60μMOP染毒不同時間后，Bcl-2mRNA的表達呈時間依賴性下降，并于染毒12小時后顯著低于對照組(P＜0.05，P＜0.01)，BaxmRNA表達水平隨著OP染毒時間的延長呈上升趨勢，且染毒18小時后表達水平顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)。 5.與mRNA的表達一致，OP染毒后，Bcl-2蛋白表達水平隨著OP染毒濃度的

5、增加和染毒時間的延長呈下降趨勢，且50、60μM組及18、24小時組與對照組相比差異具有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。Bax蛋白表達水平在50、60μM組及12、18、24小時組顯著上升(P＜0.01)。 以上結(jié)果表明，OP可引起Sertoli細胞的凋亡，其凋亡機制可能與凋亡相關(guān)因子Bcl-2的下調(diào)和Bax的上調(diào)以及由此引起Caspase-3凋亡通路的激活有關(guān)。 第二部分辛基酚對大鼠睪丸Sertoli細胞DNA的損

6、傷 為研究OP對大鼠睪丸Sertoli細胞DNA的損傷，我們以大鼠睪丸Sertoli細胞為研究對象，在建立睪丸Sertoli細胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以不同濃度的OP(30-60μM)直接作用于Sertoli細胞24小時或60μMOP直接作用于Sertoli細胞6-24小時。采用彗星實驗檢測Sertoli細胞DNA的損傷，結(jié)果如下： 彗星實驗中，對照組Sertoli細胞呈圓形，除自然發(fā)生DNA斷裂的細胞外，無拖尾現(xiàn)象；

7、各OP染毒組的Sertoli細胞均發(fā)生了不同程度的拖尾；隨著OP劑量的增加以及染毒時間的延長，尾DNA﹪和olive尾矩(OTM)值呈上升趨勢，與對照組相比染毒組變化有顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)果表明，OP能引起Sertoli細胞DNA的損傷。 第三部分辛基酚對大鼠睪丸Sertoli細胞功能的影響 為研究OP對大鼠睪丸Sertoli細胞功能的影響，我們以大鼠睪丸Sertoli細胞為研究對象，在建立睪丸Ser

8、toli細胞體外原代培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，以不同濃度的OP(30-60μM)直接作用于Sertoli細胞24小時或60μMOP直接作用于Sertoli細胞6-24小時。 1.不同濃度的OP作用于Sertoli細胞24h后，各劑量組細胞活性與對照組相比呈下降趨勢，并且40-60μMOP顯著降低了Sertoli細胞的活性(P＜0.01)；60μMOP能引起Sertoli細胞活性呈時間依賴性下降，并在OP作用于Sertoli細胞12h以后