穿心蓮內(nèi)酯抗單一與混合生物膜作用及其與慶大霉素的協(xié)同作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分：體外實(shí)驗(yàn)
　　[目的]研究穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide，Andro)抗銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aures)單一與混合生物膜作用及其與慶大霉素(Gentamicin，GEN)的協(xié)同作用。
　　[方法]本研究選擇銅綠假單胞菌PA01與金黃色葡萄球菌的臨床分離株CY001

2、、CY002以及標(biāo)準(zhǔn)株ATCC25923作為實(shí)驗(yàn)菌株。比濁法測(cè)定Andro(100μ g/ml)對(duì)PA01與S.aureus各菌株生長(zhǎng)的影響;建立PA01與S.aureus單一與混合生物膜的體外模型，分為對(duì)照組、Andro干預(yù)組、GEN干預(yù)組以及Andro與GEN聯(lián)合干預(yù)組，結(jié)晶紫染色后，酶標(biāo)儀測(cè)量0D600nm值間接觀察各組生物膜的形成能力;掃描電鏡下直接觀察各組生物膜的結(jié)構(gòu)。
　　[結(jié)果]100μ g/mlAndro作用下，P

3、A01與S.aureus各菌株生長(zhǎng)曲線與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）;不論按照何種比例混合培養(yǎng)，在PA與S.aureus的混合生物膜中，PA的數(shù)量始終多于S.aureus;除CY002不形成生物膜，各組間兩兩比較均無(wú)明顯差異外(P＞0.05)，不管是PA與S.aureus的單一生物膜還是它們的混合生物膜，與對(duì)照組相比，在干預(yù)條件下形成的生物膜均減少（P＜0.005），其中穿心蓮內(nèi)酯對(duì)生物膜的抑制作用強(qiáng)于慶大霉素，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P＜0.05)，兩者聯(lián)用時(shí)的抗生物膜作用顯著強(qiáng)于它們分別單用(P＜0.05);掃描電鏡下形態(tài)觀察提示各干預(yù)條件對(duì)PA與S.aureus的單一與混合生物膜均有抑制作用，以Andro與GEN聯(lián)用的抑制作用最為明顯。
　　[結(jié)論]在PA與S.aureusAndro的混合生物膜中，PA占主導(dǎo)地位;Andro對(duì)PA與S.aureus無(wú)直接殺菌作用，但對(duì)它們的單一與混合生物膜均具有良好抑制作用;其與GEN聯(lián)合應(yīng)用，具有協(xié)同抗生物膜作用。<

5、br>　　第二部分：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　[目的]建立小鼠慢性創(chuàng)傷單一與混合細(xì)菌生物膜感染模型，以研究穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide，Andro)對(duì)傷口生物膜的作用及其對(duì)傷口愈合的影響。
　　[方法]建立小鼠Ⅲ°燙傷單一與混合細(xì)菌生物膜感染的體內(nèi)模型，分為空白對(duì)照組（燙傷后未感染）、對(duì)照組、Andro干預(yù)組、GEN干預(yù)組以及Andro與GEN聯(lián)合干預(yù)組，取傷口組織制作病理切片觀察并分析;將皮膚組織勻漿后ELISA法檢測(cè)炎

6、癥因子IL-1β，IL-6，TNF-α的表達(dá)水平;掃描電鏡下直接觀察各組傷口中生物膜的結(jié)構(gòu)。
　　[結(jié)果]皮膚組織的病理學(xué)分析顯示，與對(duì)照組與慶大霉素干預(yù)組相比，穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)組與聯(lián)合干預(yù)組的真皮空泡和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少，新生肉芽組織及毛細(xì)血管形成大量增加;在燙傷感染后，小鼠皮膚傷口組織各炎性因子表達(dá)量顯著升高（空白對(duì)照組與對(duì)照組相比，P值均小于0.001），慶大霉素能較弱的降低炎性因子IL-6（除CY002與CY001生物

7、膜模型組）與TNF-α（僅CY001+PA01與ATCC25923+PA01生物膜模型組）的表達(dá)，而穿心蓮內(nèi)酯能夠顯著降低傷口組織炎癥因子IL-1β，IL-6，TNF-α的表達(dá)水平(P值均小于0.005)，其與慶大霉素聯(lián)用，能夠更為顯著的降低炎癥因子IL-6（除CY001+PA01與ATCC25923+PA01生物膜模型組）與TNF-α（僅CY002+PA01與ATCC25923+PA01生物膜模型組）的水平;掃描電鏡下形態(tài)觀察提示各干