基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥分子流行及遺傳特征研究.pdf

1、氟喹諾酮是一類人工合成藥物，抗菌譜廣，是臨床使用最廣泛的一類抗菌藥物，其耐藥也尤為突出。自20世紀(jì)90年代以來(lái)，我國(guó)呈現(xiàn)出大腸埃希菌高頻耐藥(64.5％-71.8％)現(xiàn)象，有關(guān)耐藥調(diào)查以及機(jī)制研究大多集中在中心城市三級(jí)醫(yī)院，縣級(jí)醫(yī)院及社區(qū)感染細(xì)菌耐藥研究極少，開(kāi)展縣級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)社區(qū)感染患者細(xì)菌對(duì)喹諾酮類的耐藥研究，有助于指導(dǎo)這類醫(yī)療機(jī)構(gòu)感染治療和抗菌藥物合理使用。
　　本研究第一部分收集來(lái)自全國(guó)七個(gè)地區(qū)30家縣級(jí)醫(yī)院社區(qū)感染非重復(fù)大

2、腸埃希菌590株，肺炎克雷伯菌569株。細(xì)菌體外藥敏試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)17種抗菌藥物的敏感性;PCR方法檢測(cè)質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥(PMQR)基因:qnrA，qnrB，qnrC，qnrD，qnrS，aac(6')-Ib-cr，qepA和oqxAB及喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)DNA旋轉(zhuǎn)酶gyrA，gyrB亞基和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ parC，parE亞基突變，采用DNASTAR軟件分析測(cè)序結(jié)果，突變比較參照E.coli k-12和Klebsiellap

3、neumoniae MGH78578;對(duì)非QRDR介導(dǎo)耐藥菌株進(jìn)行外排泵抑制試驗(yàn)。
　　試驗(yàn)結(jié)果顯示590株大腸埃希菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率為51.2％，PMQR基因檢出率為37.3％，qnr類的流行率為3.7％，aac(6')Ib-cr19.7％，qepA14.1％，oqxAB3.9％。24株同時(shí)攜帶2種以上PMQR基因。環(huán)丙沙星耐藥組100％存在QRDR突變，93.7％是3個(gè)以上位點(diǎn)突變;敏感組66.7％存在QRDR突變。569株

4、肺炎克雷伯菌對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率為8.3％，PMQR檢出率為70.0％，qnr類流行率為36.6％，aac(6') Ib-cr9.1％，qepA43.8％。環(huán)丙沙星耐藥組73.9％存在QRDR突變，19.6％是3個(gè)以上位點(diǎn)突變。敏感組4％存在QRDR突變。12株(26.1％)肺炎克雷伯菌為非QRDR介導(dǎo)耐藥，環(huán)丙沙星最低抑菌濃度(MIC)可被外排泵抑制劑N-甲基吡咯烷酮(NMP)降為敏感水平。
　　分子流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，縣級(jí)醫(yī)院社區(qū)感

5、染大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥率相差懸殊(51.2％ versus8.3％)，原因除肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥率相比大腸埃希菌長(zhǎng)期處于較低水平外，還與肺炎克雷伯菌24.5％（大腸埃希菌9.9％）來(lái)自0-14歲兒童有關(guān)，該組環(huán)丙沙星的耐藥率僅為4.2％。大腸埃希菌在耐藥組(100％)甚至敏感組(66.7％)都有很高的QRDR突變率，對(duì)QRDR突變的積累明顯高于肺炎克雷伯菌（耐藥組73.9％，敏感組4％）。
　　本研究第二部分對(duì)

6、302株環(huán)丙沙星耐藥大腸埃希菌和46株環(huán)丙沙星耐藥肺炎克雷伯菌遺傳特征及多PMQR菌株耐藥質(zhì)粒傳播特征進(jìn)行研究。大腸埃希菌MLST分型選用UCC數(shù)據(jù)庫(kù)(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)，肺炎克雷伯菌MLST分型選用pasteur數(shù)據(jù)庫(kù)(http://bigsdb.web.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html)。測(cè)序結(jié)果在數(shù)據(jù)庫(kù)中在線比對(duì)，獲得等位基因型和序列型(S

7、T)。氟喹諾酮耐藥菌株遺傳進(jìn)化分析采用eBURST V3和商業(yè)化Bionumerics軟件。多PMQR耐藥質(zhì)粒復(fù)制子分型采用基于PCR的分型方法PBRT+ColE+IncR，可對(duì)腸桿菌科20種常見(jiàn)復(fù)制子進(jìn)行分型。并對(duì)這些多PMQR耐藥質(zhì)粒進(jìn)行接合傳播試驗(yàn)。
　　試驗(yàn)結(jié)果顯示302株環(huán)丙沙星耐藥大腸埃希菌共有60種ST型。常見(jiàn)流行型為ST131(14.6％), ST1193(7.9％), ST405(6.6％), ST69(6.3％

8、), ST648(6.3％)。華東、中南、華北、東北、西北、華南和西南地區(qū)分別有15、26、28、11、17、22和13種。46株環(huán)丙沙星耐藥肺炎克雷伯菌共有23種ST型。克隆復(fù)合體CC11(ST11，ST340，AT258)占15.2％，其次為ST1(13.0％)，ST15(10.9％)，ST147(10.9％)和ST875(8.7％)。華東、中南、華北、東北、西北、華南和西南地區(qū)分別有3、2、5、4、8、5和7種。大腸埃希菌多PMQ

9、R耐藥質(zhì)粒復(fù)制子83.3％為IncF，大多與其他復(fù)制子共存，45.8％可接合轉(zhuǎn)移耐藥基因。肺炎克雷伯菌多PMQR耐藥質(zhì)粒復(fù)制子70％為ColE-like，75％可接合轉(zhuǎn)移耐藥基因。
　　本研究通過(guò)第二部分耐藥氟喹諾酮遺傳特征分析和多PMQR耐藥質(zhì)粒復(fù)制子分型和傳播特征研究發(fā)現(xiàn)氟喹諾酮耐藥大腸埃希菌序列型多樣，在各地區(qū)呈散在分布，沒(méi)有暴發(fā)流行克隆型。肺炎克雷伯菌雖然僅46株對(duì)環(huán)丙沙星耐藥，但序列型也很豐富，達(dá)23種。也呈散在分布，無(wú)