產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌SHV基因的研究.pdf

1、【目的】 產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases，ESBLs)是腸桿菌科細(xì)菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的重要機(jī)制。該類酶可以水解青霉素類、一、二、三、四代頭孢菌素和單環(huán)酰胺類抗生素，主要產(chǎn)生于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。ESBLs主要由質(zhì)粒介導(dǎo)，因此容易造成傳播與擴(kuò)散?，F(xiàn)產(chǎn)ESBLs耐藥菌已在世界各地廣泛流行，國內(nèi)檢出率較高。由于不同國家和地區(qū)之間抗生素使用的差異，產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的

2、基因型也不同。相關(guān)研究顯示SHV型ESBLs是最常見的類型之一。為了解深圳地區(qū)產(chǎn)SHV型ESBLs的流行狀況及耐藥特性，本課題對深圳市人民醫(yī)院215株產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的SHV基因進(jìn)行分型研究，并對產(chǎn)SHV型酶菌株的耐藥性進(jìn)行分析。 【方法】 (1)收集深圳市人民醫(yī)院2000年～2003年產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分離菌株535株，其中大腸埃希菌382株，肺炎克雷伯菌153株；

3、(2)采用美國國家臨床實(shí)驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦的ESBLs表型確證試驗(紙片擴(kuò)散法)篩選出產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌共215株； (3)應(yīng)用瓊脂稀釋法檢測11種抗生素對215株產(chǎn)ESBLs菌株的最低抑菌濃度(MIC)，檢測的抗生素包括亞胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢西丁、阿米卡星、環(huán)丙沙星、氨曲南、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟。 (4)應(yīng)用堿裂解法提取產(chǎn)ESB

4、Ls菌的質(zhì)粒DNA： (5)以菌株的質(zhì)粒DNA為模板，應(yīng)用PCR法分別擴(kuò)增215株產(chǎn)ESBLs菌株的SHV基因： (6)應(yīng)用377測序儀對所有陽性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向DNA測序；并進(jìn)行序列拼接、檢索及基因分型。 (7)對新基因亞型SHV-59的特性進(jìn)行初步研究。 【結(jié)果】 (1)ESBLs的檢出率：535株臨床分離株共檢出產(chǎn)ESBLs菌215株，總陽性率為40．2％。其中大腸埃希菌151株，陽性率

5、39.5％;肺炎克雷伯菌64株，陽性率41.8％。(2)產(chǎn)ESBLs菌株的科室分布：產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌主要來源于肝膽外科，其次為ICU、婦產(chǎn)科和腎內(nèi)科；肺炎克雷伯菌主要來源于新生兒科，其次為腦外科，其它科室相對較少。 (3)產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥性： ①所有產(chǎn)ESBLs菌均對亞胺培南敏感，其它抗生素均出現(xiàn)不同程度的耐藥： ②產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌對哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和頭孢他啶耐藥率較低(分別為3.

6、3％、8.6％、9.3％)；其它藥物耐率較高，耐藥率從低至高分別為：氨曲南<阿莫西林/克拉維酸<頭孢西丁<頭孢吡肟<頭孢噻肟<環(huán)丙沙星<氨芐西林/舒巴坦。 ③產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對頭孢毗肟和哌拉西林/他唑巴坦耐藥率較低(分別為3．1％和14.1％)；其它藥物耐藥率從低至高分別為：頭孢噻肟<環(huán)丙沙星<阿莫西林/克拉維酸<頭孢西丁<阿米卡星<頭孢他啶<氨曲南<氨芐西林/舒巴坦④肺炎克雷伯菌對頭孢他啶、氨曲南和阿米卡星的耐藥率遠(yuǎn)高

7、于大腸埃希菌，而對環(huán)丙沙星、頭孢噻肟和頭孢吡肟耐藥率卻比大腸埃希菌低。 (4)SHV基因的檢測：215株產(chǎn)酶株中共54株攜帶SHV基因，總檢出率為25．1％：其中肺炎克雷伯菌52株，檢出率為81.2％；大腸埃希菌2株，檢出率為1.3％。肺炎克雷伯菌SHV基因檢出率高于大腸埃希菌，兩者差異顯著。 (5)SHV基因的分型：54株擴(kuò)增陽性的菌株中，34株為SHV-12型，7株為SHY-11型，6株為SHV-2a，3株為SHV-

8、16型，1株為SHV-2型，1株SHV-59型；其它兩株的基因序列經(jīng)比對后歸于其它組別，分別被命名為LEN-5和0KP-B-13。其中SHV-59、LEN-5，和OKP-B-13為本研究首次發(fā)現(xiàn)的新基因型。 【結(jié)論】 (1)深圳市人民醫(yī)院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs的檢出率較高。 (2)深圳市人民醫(yī)院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分離株SHV基因以SHv-12型為主要類型。產(chǎn)該類酶的細(xì)菌已在醫(yī)院