高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光檢測在兩種氨基酸手性分離分析中的應(yīng)用.pdf

1、近年來，手性化合物在生物體內(nèi)的拆分與檢測受到了廣泛的關(guān)注。由于手性化合物兩個對映體的生理活性可能不同，因此，建立準(zhǔn)確、快速、靈敏的拆分方法，對手性化合物在體內(nèi)的藥代動力學(xué)、藥效學(xué)和毒理學(xué)等研究具有十分重要的意義。而高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法集高效液相色譜高分離效率和化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)于一體，成為了一種理想的分離分析手段，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、生物、化工等領(lǐng)域。本文將利用高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法對氨基酸進(jìn)行手性拆分，并測定生物樣品中氨

2、基酸光學(xué)異構(gòu)體的含量，期冀提高氨基酸在生物體內(nèi)的檢測靈敏度。主要研究內(nèi)容如下：
　　一、高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法測定生物樣品中酪氨酸對映體的含量
　　實驗發(fā)現(xiàn)，在堿性環(huán)境中，酪氨酸衍生物能增強(qiáng)魯米諾-高錳酸鉀體系的發(fā)光信號，基于此，并結(jié)合高效液相色譜的手性分離技術(shù)，構(gòu)建了一種高效液相色譜分離，化學(xué)發(fā)光檢測酪氨酸衍生物的新方法。在 C18反相色譜柱，以甲醇-0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（35:65，v:v）為流動相的實驗條

3、件下，實現(xiàn)了酪氨酸對映體在生物樣品中的手性分離與檢測。酪氨酸兩對映體血漿樣品均在2.5×10-7~3.2×10-5 g/mL濃度范圍內(nèi)與相對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系（r1=0.9993，r2=0.9992），該方法的檢測限分別為2.96×10-8 g/mL，3.59×10-8 g/mL。對濃度為1.0×10-6 g/mL的酪氨酸單一對映體血漿樣品進(jìn)行11次平行測量，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.92％，1.09%。該方法簡單、選擇性好、靈

4、敏度高，已被成功應(yīng)用于生物樣品中酪氨酸單一對映體的含量測定。
　　二、高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法測定生物樣品中色氨酸對映體的含量
　　本研究基于色氨酸對映體衍生物在堿性介質(zhì)中能抑制魯米諾-硫氰化鉀的發(fā)光強(qiáng)度，建立了一種檢測色氨酸對映體的高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光新方法，且已應(yīng)用于生物樣品中色氨酸單一對映體的含量測定。實驗分別對流動相的組成及配比、流速、柱溫等色譜條件及化學(xué)發(fā)光體系中各試劑濃度等檢測條件進(jìn)行了考察。在優(yōu)化好的實驗條件

5、下，色氨酸兩對映體血漿樣品的線性范圍均為2.5×10-7~1.2×10-5 g/mL，檢測限分別為1.98×10-7 g/mL，2.39×10-7 g/mL。對濃度為2.0×10-6 g/mL的色氨酸單一對映體血漿樣品平行測定了11次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.24%，3.82%。實驗表明該法簡便、快速、可靠，適用于生物樣品中色氨酸單一對映體的含量測定。
　　本研究建立的高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法簡便、可靠、選擇性好、靈敏度高，適用于生