核殼柱液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測聯(lián)用及其在20種氨基酸檢測中的應用.pdf

1、氨基酸是生命體基本物質(zhì)之一，也是常見的飼料添加劑、食品添加劑和藥物制劑成分。對于氨基酸分析目前存在樣品處理需進行衍生化、衍生物不穩(wěn)定、運行費用高、儀器昂貴、反應條件沖突、操作時間長等問題。蒸發(fā)光散射檢測器是一種質(zhì)量檢測器，其檢測原理為依靠物質(zhì)的揮發(fā)性不同而進行檢測，與物質(zhì)本身結(jié)構(gòu)沒有關(guān)系，適用于食品安全、藥物分析、中藥成分分析等領(lǐng)域。而Halo核殼色譜柱由于具有2.7μm的核殼多孔填料，能達到1.6μm填料的分離度的同時還具有在普通液相

2、色譜儀器上適用的柱壓，大大提高復雜產(chǎn)物的分離度?；谏鲜霰尘?，我們以蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、“HALO”核-殼型新型填料液相色譜柱聯(lián)用，初步構(gòu)建了一種高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD）直接測定20種未衍生氨基酸的分析方法，并將其用于復方氨基酸注射液中氨基酸含量的測定。該方法快速、準確、穩(wěn)定、靈敏，對混合氨基酸進行了有效的分離。
　　本論文總共分為五章，分別包括以下主要內(nèi)容：
　　第一章介紹選題背景和意

3、義。一介紹了氨基酸的種類和應用，核殼色譜柱的簡介和蒸發(fā)光散射檢測器的原理，綜述了氨基酸分析方法和研究進展。
　　第二章主要采用HILIC色譜柱、新型色譜柱HALO柱、常規(guī)普通C18色譜柱、和HALO Amide柱對氨基酸的分離進行了初步的篩選，發(fā)現(xiàn)普通C18色譜柱上要實現(xiàn)氨基酸的基線分離，運行時間至少要40分鐘左右；HILIC柱內(nèi)徑為1.0 mm，實驗中明顯發(fā)現(xiàn)該柱的柱容量和分離能力都相對較差，經(jīng)過流動相種類和梯度的調(diào)整，明顯沒有

4、HALO柱的分離效果好；極性嵌入基團的HALO Amide柱對前6種親水性較強氨基酸的分離并未能起到明顯的提高作用，同時因為柱子整體含碳量的降低，反而使得整體分離的情況稍有變差。對色譜柱柱長的調(diào)整，在梯度不變運行時間不變的情況下，氨基酸的保留明顯15 cm柱會更好些，柱長增加，系統(tǒng)壓力仍在儀器耐壓范圍內(nèi)。綜合以上對比，15 cm的HALO C18色譜柱可以達到氨基酸的分離要求。
　　第三章主要構(gòu)建核殼柱液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測20

5、種未衍生氨基酸方法的開發(fā)。通過對流動相中有機相種類、水相中三氟乙酸、七氟丁酸、九氟戊酸濃度、流速、柱溫等條件進行優(yōu)化，同時進行了蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)的優(yōu)化，最終確定了采用HALO C18柱（2.7μm，4.6 mm I.D.×15 cm），以甲醇-九氟戊酸-七氟丁酸-三氟乙酸-水為流動相進行梯度洗脫，流速0.5 ml/min，ELSD飄移管溫度40℃，載氣流速3.0 L/min，對20種未衍生氨基酸進行分離檢測。
　　第四章主要對

6、篩選的色譜方法進行了分析方法驗證。結(jié)果氨基酸的質(zhì)量濃度在0.01～1.0 mg/ml范圍內(nèi)，其峰面積的對數(shù)值與進樣質(zhì)量的對數(shù)值呈良好的線性關(guān)系；氨基酸的檢出限介于20～50 ng之間，樣品加標回收率為89.0％～111.2％。連續(xù)進6針，各氨基酸的精密度均符合要求。不同儀器、不同批號色譜柱進行系統(tǒng)實用性實驗，均符合要求。該方法可直接進行樣品檢測，無需樣品衍生化處理，簡單、快捷。
　　第五章總結(jié)了本論文主要的三部分實驗的研究成果，提