肥胖與體重正常女性皮下脂肪組織差異microRNA的分析.pdf

1、目的:肥胖發(fā)病率日益升高，給全社會帶來沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。microRNA（miRNA）是一組保守的非編碼小RNA，可以在轉(zhuǎn)錄后水平對靶基因發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。本文旨在研究肥胖、正常體重女性皮下脂肪組織miRNA的表達(dá)差異，探究miRNA調(diào)節(jié)肥胖發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。
　　方法:納入3名肥胖女性和5名體重正常女性，中位年齡分別為40(30-56)歲和49(37-51)歲，完善臨床資料、生化指標(biāo)測定。取腹部皮下脂肪組織，抽提包含miRNA在內(nèi)的

2、總RNA，與Affymetrix miRNA4.0芯片雜交，并進(jìn)行差異miRNA的篩選和聚類分析。利用軟件miRanda和Targetscan預(yù)測差異miRNA的靶基因，利用GO數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對靶基因進(jìn)行顯著性功能分析和顯著性信號通路分析。將所納入的樣本擴(kuò)增為8名肥胖女性和9名體重正常女性，平均年齡分別為34.88±9.67歲和42.11±6.68歲，采用實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)方法對部分差異miRNA進(jìn)行驗(yàn)證，并在

3、信使RNA(mRNA)的層面檢測部分靶基因在兩組間的表達(dá)。
　　結(jié)果:肥胖女性體質(zhì)指數(shù)(BMI)、體重、腰圍顯著高于體重正常對照(P＜0.05)。皮下脂肪組織miRNA芯片提示:與體重正常女性相比，肥胖女性皮下脂肪組織中共有58種miRNA出現(xiàn)了4倍以上的差異表達(dá)，其中，54種miRNA表達(dá)下調(diào)，4種miRNA表達(dá)上調(diào)（倍數(shù)＞4，P＜0.01，F(xiàn)DR＜0.05）。針對差異miRNA，采用兩種不同的靶基因預(yù)測軟件——miRanda和

4、Targetscan預(yù)測出交集靶基因1333個。這些靶基因使269個功能和89條信號通路發(fā)生了顯著性改變(P＜0.001，F(xiàn)DR＜0.05)。其中，顯著性改變程度較高的生物學(xué)功能包括:DNA的轉(zhuǎn)錄及其調(diào)控，細(xì)胞粘附，小分子物質(zhì)代謝等。顯著性改變程度較高的信號通路包括:MAPK通路、癌癥相關(guān)通路、PI3K-Akt通路等。進(jìn)一步，采用qRT-PCR的方法證實(shí)miR-143-3p，miR-143-5p，miR-145-5p和let-7a-5p

5、在肥胖女性皮下脂肪組織中顯著下調(diào)，表達(dá)量分別為體重正常對照的68％(P=0.046)、61％(P=0.016)、73％(P=0.042)、66％(P=0.006)，與miRNA基因芯片的檢測結(jié)果一致。更進(jìn)一步，對上述差異miRNA預(yù)測所得的靶基因，包括高遷移率族蛋白A2(HMGA2)，Thy1細(xì)胞表面抗原(THY1)、Tar DNA結(jié)合蛋白(TARDBP)、銜接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸結(jié)合域和亮氨酸拉鏈基元1(APPL1)、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)

6、蛋白-1(FATP1)、葡萄糖磷酸變位酶3(PGM3)的mRNA水平進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)let-7a-5p調(diào)控的靶基因HMGA2在肥胖女性皮下脂肪組織中表達(dá)明顯增加，是體重正常女性的3.19倍(P=0.025)。
　　結(jié)論:肥胖女性的皮下脂肪組織中58種miRNA出現(xiàn)了4倍以上的差異表達(dá)，其中，93％(54/58)的差異miRNA表達(dá)下調(diào)，7％(4/58)的差異miRNA表達(dá)上調(diào)，這些差異miRNA預(yù)測調(diào)節(jié)的靶基因主要參與DNA的