胃竇粘膜組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白與Tgf-β1的表達及相關性研究.pdf

1、背景:
　　本研究課題的產(chǎn)生源自一個消化性潰瘍藥物療效觀察課題的預實驗。該實驗旨在觀察粘膜保護劑使用對于消化性潰瘍愈合質量的影響。在預實驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)胃竇活檢粘膜組織中膠原纖維的表達在不同胃疾病中存在明顯差異。而影響其合成與分解的重要生長因子之一是Tgf-β1。在進一步的文獻復習中，我們確認了Tgf-β1在干預胃疾病的轉歸中起到重要的作用，由其調控合成的IV型膠原蛋白在判定腫瘤侵蝕性與轉移中占據(jù)了關鍵的地位。但在既往研究中，大

2、多數(shù)文獻資料涉及的都是針對腎臟、肺和皮膚組織的纖維表達的相關研究，針對胃粘膜疾病膠原纖維表達量及表達形態(tài)的研究并不完整。胃竇粘膜中膠原蛋白和Tgf-β1的表達與疾病進展之間的關系及其相關機制并不系統(tǒng)。因此萌生了分析不同胃粘膜疾病的病理標本中，各型膠原蛋白與Tgf-β1的表達及相關性的念頭。
　　目前胃疾病的診斷，主要通過臨床癥狀、理化檢驗、影像檢查、病理活檢等途徑。與通過常規(guī)手術獲取病理標本相比較，胃鏡下粘膜活檢獲取病理標本的方式

3、在保證準確度的前提下，有創(chuàng)傷小，操作便捷，副作用少，患者痛苦小，經(jīng)濟付出少等優(yōu)勢，必要時甚至可多次活檢進行比對。本實驗通過檢測胃竇粘膜不同病變組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白的表達，比較各膠原蛋白在不同病變組織中的構成比例，分析其與Tgf-β1表達及胃粘膜疾病轉歸的相關性及形態(tài)學特征，探討胃竇粘膜膠原纖維表達變化與粘膜疾病轉歸之間的相關性。
　　第一部分:胃竇粘膜組織中膠原纖維差異性比較
　　目的:比較不同病變胃竇粘膜病理標本中膠

4、原纖維的表達差異。
　　材料和方法:選取2013年11月至2014年3月間我院50例胃竇粘膜標本，分別為正常對照組6例（男性1例，女性5例）、胃潰瘍20例（男性13例，女性7例）、不典型增生13例（男性7例，女性6例）、腺癌11例（男性7例，女性4例）。平均年齡正常對照組為36.17±10.91歲，潰瘍組為47.70±13.94歲，不典型增生組為47.08±7.44歲，腺癌組為65.55±8.36歲。分別收集四組病例資料，包括:(

5、1)一般資料:性別、年齡、姓名;(2) Hp檢測:碳13呼吸實驗，快速尿素酶試驗;(3)常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋切片確定病理類型;(4)膠原纖維表達檢測:馬松(Masson)染色后，依次用Image-Pro Plus6.0軟件分析圖片→Invert contrast反相應用照片→photoshop轉化為黑白灰階→calibratio、intensitycalibration、std optical density校正光密度→分析其中膠原

6、纖維的沉積面積、累積光密度及平均光密度，比較各組間膠原纖維的表達差異。運用SPSS17.0軟件進行分析，測得數(shù)據(jù)用均值±標準差（x±s）表示，兩獨立樣本率的比較采用x2檢驗，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較，方差齊采用LSD-t法多重比較，若方差不齊，采用Dunnett's T3多重比較。小樣本采用Fisher精確概率法，計量資料采用t檢驗。以α=0.05作為統(tǒng)計學檢驗水準
　　結果:1.一

7、般資料分析結果:各組在性別上差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。但年齡差異有統(tǒng)計學意義，腺癌組平均年齡最高（65.55±8.36），最低為正常對照組（36.17±10.91）(P＜0.01)。2.Hp結果:正常對照組6例（陽性3例，陰性3例）、胃潰瘍20例（陽性11例，陰性9例）、不典型增生13例（陽性7例，陰性6例）、腺癌11例（陽性7例，陰性4例），四組間Hp感染率相比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。3.膠原纖維表達:腺癌組的纖維沉積

8、面積和膠原纖維表達量均為四組中最高（沉積面積=108535.82±61071.51）（累積光密度=29993.2041±16828.8527），均高于正常對照組，且表達曲線（正常對照組-潰瘍組-不典型增生組-腺癌組）呈逐漸上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P沉積面積＞0.05（P值=0.106，）;P累積光密度＞0.05(P=0.135))。四組間膠原纖維單位表達強度平均光密度腺癌組最高（平均光密度=436.26±127.60），其次為潰瘍

9、組（平均光密度=417.23±114.70），再次為不典型增生組（平均光密度=374.28±124.77），差異有統(tǒng)計學意義P＜0.01(P=0.003)。
　　結論:通過馬松染色觀察不同病理狀態(tài)下胃竇黏膜組織中膠原纖維的表達，結果顯示，不同胃粘膜疾病中，膠原纖維的表達存在差異。在胃粘膜疾病進展為胃癌的過程中，膠原纖維隨著疾病的嚴重程度增加呈曲折上升趨勢，與疾病的轉歸具有相關性。
　　第二部分:胃竇粘膜病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型

10、膠原蛋白與Hp感染和Tgf-β1的表達及相關性
　　目的:檢測胃竇黏膜病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白、Tgf-β1的表達，分析各膠原蛋白在不同病理組織中的構成比例以及與Tgf-β1的關系，探索它們在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的形態(tài)學時相特征。
　　材料和方法:一般資料同第一部分，病理組織石蠟包埋后連續(xù)切片進行免疫組化染色，采用Image-Pro Plus6.0軟件分析圖片:依次為Invert contrast反相應用照片→photo

11、shop轉化為黑白灰階→calibratio、intensity calibration、std opticaldensity校正光密度，分析其中膠原蛋白的表達強度、表達總量，比較不同病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白的表達比例及其與Tgf-β1表達的相關性。運用SPSS17.0軟件進行分析，測得數(shù)據(jù)用均值±標準差（x±s）表示，兩獨立樣本率的比較采用x2檢驗，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較，方差齊

12、采用LSD-t法多重比較，若方差不齊，采用Dunnett's T3多重比較。小樣本采用Fisher精確概率法，計量資料采用t檢驗。用歸一化表示各組蛋白比例。以α=0.05作為統(tǒng)計學檢驗水準，即P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:Ⅰ型膠原蛋白在正常對照組中表達量顯著高于其他三組（sum=433323.01±155851.81），在不典型增生組中表達有小幅度回升（sum=296570.87±76497.88），差異有統(tǒng)計學意義P

13、＜0.05（P值=0.000）。Ⅲ型膠原蛋白在腺癌組中表達明顯（sum=257891.93±63202.40），從正常對照組到腺癌組呈逐漸上升趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0.05（P值=0.012）。Ⅳ型膠原蛋白在不典型增生組中的表達最高（sum=212256.92±57764.42），潰瘍組中表達最低（sum=143975.67±38955.55），但差異無統(tǒng)計學意義P＞0.05（P值=0.288）。Tgf-β1在正常對照組中表達最高

14、（sum=153894.16±51428.16），其次為不典型增生組（sum=144626.53±100117.19），潰瘍組及腺癌組中的表達量相對較低(sum潰瘍=107271.98±30403.97、sum腺癌=120607.17±32781.73)，但差異無統(tǒng)計學意義P＞0.05（P值=0.216）。各組內Hp感染與蛋白表達情況比較顯示，未感染Hp的人群Ⅰ型膠原蛋白的表達強度較已感染人群表達高（Hp陰性315.40±293.27＞