孟魯司特對(duì)THP-1源泡沫細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 1．研究THP-1單核細(xì)胞在向巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞分化過程中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9基因和蛋白表達(dá)及其分泌的變化。
　　 2．探討孟魯司特對(duì)THP-1源泡沫細(xì)胞的形成及其對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9蛋白表達(dá)和分泌的影響。
　　 方法：
　　 1．人單核細(xì)胞系(THP-1)用160nmol/L佛波酯(Phogrbol12-myristate13-acetat

2、e，PMA)誘導(dǎo)24小時(shí)后分化成為巨噬細(xì)胞，繼與50mg/L的氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)共同孵育48小時(shí)建立泡沫細(xì)胞模型。油紅0染色后顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)鑒定泡沫細(xì)胞的形成。并通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)(RT-PCR)和Westernblot分別檢測(cè)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞分化過程中MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)的變化，同時(shí)用Gelatinzymography檢測(cè)細(xì)胞上清中MMP-2和MMP-9活性的變化。

3、r>　　 2．人單核細(xì)胞株(THP-1)用160nmol/LPMA誘導(dǎo)24小時(shí)后分化成為巨噬細(xì)胞后，先給予以不同濃度的孟魯司特(0.1、0.01μmol/L)預(yù)處理4小時(shí)，再加入50mg/LOX-LDL共同孵育48小時(shí)。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組（20μmol/L的MMP-2/9抑制劑）及空白對(duì)照組。油紅0染色后顯微鏡下觀察各處理組中泡沫細(xì)胞的形成，并通過Westernblot和Gelatinzymography分別檢測(cè)不同處理組細(xì)胞內(nèi)MMP-

4、2和MMP-9蛋白的表達(dá)及細(xì)胞上清中MMP-2和MMP-9活性的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．油紅O染色后顯微鏡下觀察示巨噬細(xì)胞未被油紅O染色，而加入50mg/LOX-LDL孵育48小時(shí)后可見大量細(xì)胞胞質(zhì)被油紅O染成紅色，表明泡沫細(xì)胞建模成功。而孟魯司特及MMP-2/9抑制劑預(yù)處理組細(xì)胞胞質(zhì)染色明顯淺于泡沫細(xì)胞組，表明孟魯司特及MMP-2/9抑制劑能下調(diào)OX-LDL介導(dǎo)的泡沫細(xì)胞的形成。
　　 2．THP-1單

5、核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞分化過程中MMP-2mRNA表達(dá)量分別增加了1.03倍和2.45倍(P＞0.05，P＜0.01);MMP-9mRNA表達(dá)量分別增加了2.71倍和2.75倍(P＜0.05，P＜0.01)。巨噬細(xì)胞與泡沫細(xì)胞相比，MMP-2mRNA增加了2.40倍(P＜0.01);MMP-9mRNA水平均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 3．THP-1單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞分化過程中MMP-2蛋白的表達(dá)量分別增加了

6、2.30倍和5.44倍(P＜0.01，P＜0.01);MMP-9蛋白的表達(dá)量分別增加了5.98倍和9.14倍（P＜0.01，P＜0.01）。巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞中的MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)量分別增長(zhǎng)了2.35倍和1.52倍(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 4．THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞后proMMP-9提高了約6.00倍(P＜0.05)，但是兩組間proMMP-2卻沒有差異（P＜0.05）：進(jìn)一步誘導(dǎo)成為泡沫細(xì)胞后

7、，proMMP-9和proMMP-2相對(duì)THP-1細(xì)胞分別提高了7.37倍(P＜0.05)和2.44倍（P＜0.05）；相對(duì)于巨噬細(xì)胞分別提高了1.22倍(P＜0.05)和2.52倍(P＜0.05)．
　　 5．THP-1細(xì)胞基本不分泌活性MMP-2和MMP-9，當(dāng)其誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞后分泌明顯增多(P＜0.01)，孵育成泡沫細(xì)胞后分泌量進(jìn)一步升高，相對(duì)巨噬細(xì)胞表達(dá)分別增長(zhǎng)了3.52倍(P＜0.01)和2.50倍(P＜0.01)。

8、
　　 6．孟魯司特(0.1、0.01μmol/L)能顯著下調(diào)THP-1源泡沫細(xì)胞內(nèi)MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)(P＜0.05，P＜0.05)，不同濃度藥物干預(yù)組間有濃度依賴趨勢(shì)但組間的差異沒有顯著性(P＞0.05)。同時(shí)下調(diào)OX-LDL誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞上清中活性MMP-2和MMP-9的分泌(P＜0.01，P＜0.01)，不同濃度的藥物干預(yù)組間有濃度依賴趨勢(shì)但組間的差異沒有顯著性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：

9、　　 1．THP-1細(xì)胞經(jīng)佛波酯和OX-LDL誘導(dǎo)后，能成功建立THP-1源性泡沫細(xì)胞模型。
　　 2．THP-1細(xì)胞向巨噬、泡沫細(xì)胞分化過程中細(xì)胞內(nèi)MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表達(dá)及細(xì)胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表達(dá)均逐步增加。
　　 3．孟魯司特可抑制OX-LDL介導(dǎo)的泡沫細(xì)胞的形成，并顯著下調(diào)泡沫細(xì)胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)及細(xì)胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表達(dá)。為防治動(dòng)脈粥樣硬