孟魯司特對THP-1源泡沫細胞MMP-2和MMP-9表達的影響.pdf

1、目的：
　　 1．研究THP-1單核細胞在向巨噬細胞、泡沫細胞分化過程中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9基因和蛋白表達及其分泌的變化。
　　 2．探討孟魯司特對THP-1源泡沫細胞的形成及其對基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9蛋白表達和分泌的影響。
　　 方法：
　　 1．人單核細胞系(THP-1)用160nmol/L佛波酯(Phogrbol12-myristate13-acetat

2、e，PMA)誘導24小時后分化成為巨噬細胞，繼與50mg/L的氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)共同孵育48小時建立泡沫細胞模型。油紅0染色后顯微鏡下觀察細胞形態(tài)鑒定泡沫細胞的形成。并通過反轉錄-聚合酶鏈式擴增反應(RT-PCR)和Westernblot分別檢測單核細胞向巨噬細胞、泡沫細胞分化過程中MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白表達的變化，同時用Gelatinzymography檢測細胞上清中MMP-2和MMP-9活性的變化。

3、r>　　 2．人單核細胞株(THP-1)用160nmol/LPMA誘導24小時后分化成為巨噬細胞后，先給予以不同濃度的孟魯司特(0.1、0.01μmol/L)預處理4小時，再加入50mg/LOX-LDL共同孵育48小時。同時設陽性對照組（20μmol/L的MMP-2/9抑制劑）及空白對照組。油紅0染色后顯微鏡下觀察各處理組中泡沫細胞的形成，并通過Westernblot和Gelatinzymography分別檢測不同處理組細胞內MMP-

4、2和MMP-9蛋白的表達及細胞上清中MMP-2和MMP-9活性的表達。
　　 結果：
　　 1．油紅O染色后顯微鏡下觀察示巨噬細胞未被油紅O染色，而加入50mg/LOX-LDL孵育48小時后可見大量細胞胞質被油紅O染成紅色，表明泡沫細胞建模成功。而孟魯司特及MMP-2/9抑制劑預處理組細胞胞質染色明顯淺于泡沫細胞組，表明孟魯司特及MMP-2/9抑制劑能下調OX-LDL介導的泡沫細胞的形成。
　　 2．THP-1單

5、核細胞向巨噬細胞、泡沫細胞分化過程中MMP-2mRNA表達量分別增加了1.03倍和2.45倍(P＞0.05，P＜0.01);MMP-9mRNA表達量分別增加了2.71倍和2.75倍(P＜0.05，P＜0.01)。巨噬細胞與泡沫細胞相比，MMP-2mRNA增加了2.40倍(P＜0.01);MMP-9mRNA水平均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 3．THP-1單核細胞向巨噬細胞、泡沫細胞分化過程中MMP-2蛋白的表達量分別增加了

6、2.30倍和5.44倍(P＜0.01，P＜0.01);MMP-9蛋白的表達量分別增加了5.98倍和9.14倍（P＜0.01，P＜0.01）。巨噬細胞和泡沫細胞中的MMP-2和MMP-9蛋白的表達量分別增長了2.35倍和1.52倍(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 4．THP-1細胞誘導成巨噬細胞后proMMP-9提高了約6.00倍(P＜0.05)，但是兩組間proMMP-2卻沒有差異（P＜0.05）：進一步誘導成為泡沫細胞后

7、，proMMP-9和proMMP-2相對THP-1細胞分別提高了7.37倍(P＜0.05)和2.44倍（P＜0.05）；相對于巨噬細胞分別提高了1.22倍(P＜0.05)和2.52倍(P＜0.05)．
　　 5．THP-1細胞基本不分泌活性MMP-2和MMP-9，當其誘導成為巨噬細胞后分泌明顯增多(P＜0.01)，孵育成泡沫細胞后分泌量進一步升高，相對巨噬細胞表達分別增長了3.52倍(P＜0.01)和2.50倍(P＜0.01)。

8、
　　 6．孟魯司特(0.1、0.01μmol/L)能顯著下調THP-1源泡沫細胞內MMP-2和MMP-9蛋白的表達(P＜0.05，P＜0.05)，不同濃度藥物干預組間有濃度依賴趨勢但組間的差異沒有顯著性(P＞0.05)。同時下調OX-LDL誘導的泡沫細胞上清中活性MMP-2和MMP-9的分泌(P＜0.01，P＜0.01)，不同濃度的藥物干預組間有濃度依賴趨勢但組間的差異沒有顯著性(P＞0.05)。
　　 結論：

9、　　 1．THP-1細胞經佛波酯和OX-LDL誘導后，能成功建立THP-1源性泡沫細胞模型。
　　 2．THP-1細胞向巨噬、泡沫細胞分化過程中細胞內MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表達及細胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表達均逐步增加。
　　 3．孟魯司特可抑制OX-LDL介導的泡沫細胞的形成，并顯著下調泡沫細胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表達及細胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表達。為防治動脈粥樣硬