HA-CD44信號通路對POAG小梁網(wǎng)細胞表達MMP-2，MMP-9的影響.pdf

1、目的:探討體外培養(yǎng)原發(fā)性開角型青光眼小梁細胞的方法及其生物學(xué)特性，在此基礎(chǔ)上研究透明質(zhì)酸(hyaluronic acid or hyaluronate HA)以及HA-CD44信號通路對體外培養(yǎng)小梁細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶-2，9(MMP-2.9)的影響。 方法:采用原發(fā)性開角型青光眼患者小梁切除術(shù)中取得帶小梁網(wǎng)的鞏膜組織塊進行體外培養(yǎng)。運用透射電鏡，免疫細胞化學(xué)等方法對細胞進行鑒定，觀察其生物學(xué)特性，并與正常小梁細胞進行比較。采

2、用RT-PCR和酶譜法檢測體外培養(yǎng)的傳3代小梁細胞經(jīng)濃度為0mg/ml(對照組)，1mg/ml，3mg/ ml，6mg/ml的HA處理24小時的體外培養(yǎng)的開角型小梁細胞表達MMP-2，MMP-9的量；運用CD44抗體，MEK1的抑制劑PD98059抑制HA-CD44信號通路的活化，觀察MMP-2，MMP-9表達量的變化。 結(jié)果:1.組織塊培養(yǎng)10天左右，可見細胞從其邊緣向外生長。經(jīng)鑒定為原發(fā)性開角型青光眼小梁細胞，與正常小梁細胞

3、相比，其纖維連接蛋白、層粘連蛋白表達水平相對較高。但其細胞表面的微絨毛，胞漿的溶酶體、吞噬小泡含量相對減少。 2.應(yīng)用RT-PCR法檢測經(jīng)濃度為1mg/ ml，3 mg/ml，6mg/ml的HA處理的實驗組細胞MMP-2/GAPDH吸光度的比值分別1.11±0.03，1.41±0.04，1.87±0.03，各實驗組與對照組0.63±0.06相比，P<0.05，均有顯著性差異，另經(jīng)10μg/ml的CD44抗體，50μM的PD980

4、59提前預(yù)處理1小時后加入6mg/ml的HA實驗組細胞MMP-2/GAPDH吸光度的比值分別0.43±0.05，0.26±0.03。與未預(yù)處理的6mg/ml的HA實驗組相比，P<0.05，均有顯著性差異。1mg/ml，3mg/ml，6mg/ml的HA處理的實驗組小梁細胞MMP-9/B-action吸光度的比值分別1.10±0.05，1.35±0.06，2.08±0.04，各實驗組與對照組0.67±0.0.05相比，P<0.05均有顯著差

5、異，另外經(jīng)10μg/ml的CD44抗體，50μM的PD98059提前預(yù)處理1小時后加入6mg/ml的HA實驗組細胞MMP-9/B-action吸光度的比值分別0.51±0.04，0.33+0.03。與未預(yù)處理的6mg/ml的HA實驗組相比，P<0.05均有顯著性差異。 3.酶譜法檢測1mg/ml，3mg/ml，6mg/ml的HA處理實驗組細胞MMP-2條帶酶解量分別為264.50±5.84，353.39±2.56，447.64±

6、5.451，與對照組176.43±5.77相比，P<0.05均有顯著差異，另外經(jīng)10μg/ml的CD44抗體，50μM的PD98059提前預(yù)處理1小時后加入6mg/ml的HA實驗組細胞MMP-2條帶酶解量分別113.29±5.95，61.58±4.09。與未預(yù)處理的6mg/ml的HA實驗組相比，P<0.05均有顯著差異。1mg/ ml，3 mg/ml，6mg/ml的HA處理實驗組細胞MMP-9條帶酶解量分別為658.51±9.27，89

7、5.06±7.15，1146.75±13.04與對照組546.65±5.09相比，P<0.05均有顯著差異，另外經(jīng)10μg/ml的CD44抗體，50μM的PD98059提前預(yù)處理1小時后加入6mg/ml的HA實驗組細胞MMP-9條帶酶解量分別282.41±7.44，167.47±4.84。與未預(yù)處理的6mg/ml的HA實驗組相比，P<0.05均有顯著差異。 結(jié)論:1.采用組織塊法能夠成功的體外培養(yǎng)原發(fā)性開角型青光眼人眼小梁細胞。