丹紅、CRP對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞MMP-1表達(dá)的影響及機(jī)制.pdf

1、背景及目的:急性冠脈綜合癥(ACS acute coronary syndrome)是心血管病急癥之一,其共同病理生理學(xué)基礎(chǔ),即在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)上,發(fā)生斑塊破裂或糜爛、潰瘍、并發(fā)血栓形成、血管收縮、微血管栓塞等導(dǎo)致急性或亞急性的心肌供氧減少。研究表明斑塊破裂除與炎癥、血管內(nèi)皮功能障礙、血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定、平滑肌細(xì)胞(VSMC Smooth muscle cells)增殖和功能改變、細(xì)胞凋亡等有關(guān)外,還與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS Ma

2、trix metalloproteinases)分解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM Extracellular matrix),C反應(yīng)蛋白(CRP C-reactive protein)增加具有相關(guān)性。目前已證實(shí)巨噬細(xì)胞和CRP及MMPS在斑塊中發(fā)揮了重要作用。中藥丹紅可能具有增加冠脈血流量,降低心肌耗氧量,抗心肌缺血和降低血液黏稠度等作用。通過(guò)上述;丹紅、CRP、MMPS之間是否存在某些聯(lián)系?本文主要通過(guò)探討CRP對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬

3、蛋白酶-1(MMP-1 Matrix meta1loproteinases-1)的蛋白和mRNA表達(dá)及相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路NF-KB的影響,同時(shí)觀察中藥丹紅對(duì)MMP-1的表達(dá)影響。深入了解ACS的發(fā)生、發(fā)展和發(fā)病機(jī)制、以及中藥丹紅對(duì)ACS患者的保護(hù)作用。
　　方法:RPMI1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(THP-l細(xì)胞),待數(shù)量達(dá)到5.0×106個(gè)/ml時(shí),分別接種6孔板。采用佛波醇(PMA Phorbol12-myris

4、tate13-acetate)將THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞,用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay)測(cè)定巨噬細(xì)胞細(xì)胞6、12、24、48、72小時(shí)MMP-1蛋白表達(dá)時(shí)間,確定巨噬細(xì)胞分泌MMP-1峰值時(shí)間。再將其分為對(duì)照組、CRP干預(yù)組、BAY-117085干預(yù)組(CRP+通道抑制劑BAY-117085)、丹紅干預(yù)組。ELISA測(cè)定不同組別細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白

5、濃度,再用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR Reverse transcription-polymerase chain reaction)法測(cè)定 CRP和BAY-117085干預(yù)組MMP-1的mRNA表達(dá)。比較分析MMP-1蛋白濃度和mRNA表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:在顯微鏡下觀察到細(xì)胞株THP-1在佛波醇誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞,24小時(shí)細(xì)胞上清液MMP-1表達(dá)到峰值。與對(duì)照組相比,CRP干預(yù)組 MMP-1蛋白和mRNA表達(dá)升高,

6、5mg/L、10mg/L、25 mg/L、50mg/L CRP時(shí)MMP-1表達(dá)逐漸增高(P＜0.05),呈劑量依賴性升高水平。BAY-117085干預(yù)組MMP-1的表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.01)但低于CRP(50mg/L)組(P＜0.01),BAY-117085干預(yù)組未完全降低MMP-1表達(dá)水平,丹紅干預(yù)組MMP-1的表達(dá)降低(P＜0.05)。組內(nèi)比較CRP呈濃度依賴性促進(jìn)MMP-1表達(dá), BAY-117085干預(yù)組部分阻斷了CRP對(duì)M

7、MP-1表達(dá)的促進(jìn)作用,丹紅濃度分別為0ul/ml、200ul/ml、400ul/ml、800ul/ml、1600ul/ml、3200ul/ml時(shí)MMP-1呈平臺(tái)性降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:PMA在48小時(shí)能完全誘導(dǎo)懸浮THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)變貼壁的巨噬細(xì)胞,CRP能在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平誘導(dǎo)THP-1源巨噬細(xì)胞表達(dá)MMP-1,這種調(diào)節(jié)作用可能通過(guò)NF-KB信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。丹紅能顯著抑制MMP-1的表達(dá),可能對(duì)穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊具有一