用豆?fàn)钅椅豺誓乙好庖邉?dòng)物的形態(tài)觀察及快速診斷方法的研究.pdf

1、兔豆?fàn)钅椅豺什∈怯啥範(fàn)顜Ы{蟲(chóng)的中絳期豆?fàn)钅椅豺始纳谕玫母闻K、大網(wǎng)膜、腸系膜和腹腔內(nèi)引起的一種多發(fā)常見(jiàn)的絳蟲(chóng)病，但是目前還沒(méi)有活體診斷方法。為了建立一種快速診斷該病的血清學(xué)方法，本研究通過(guò)對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的免疫形態(tài)的研究和PVC-Dot-ELISA方法分別驗(yàn)證豆?fàn)钅椅豺誓乙旱鞍椎拿庖咴院头磻?yīng)原性，即驗(yàn)證豆?fàn)钅椅豺誓乙旱鞍卓梢宰鳛槊庖咴目尚行?。然后純化篩選囊液蛋白并進(jìn)行鑒定。再通過(guò)免疫方法獲得小鼠陽(yáng)性血清，建立阻斷 ELISA診斷方法。分別

2、用兔腦炎原蟲(chóng)病、兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病、兔弓形蟲(chóng)病和球蟲(chóng)病陽(yáng)性血清，檢測(cè)其特異性。應(yīng)用該檢測(cè)方法檢測(cè)兔血清臨床樣品，測(cè)定檢測(cè)率。
　　免疫形態(tài)研究結(jié)果表明，脾臟的脾小結(jié)明顯增多，生發(fā)中心發(fā)育明顯，動(dòng)脈周?chē)馨颓拭芗?；回腸和腸系膜淋巴結(jié)的固有層內(nèi)的T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞明顯增多；鼠脾臟和回腸內(nèi)有大量的陽(yáng)性 T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，表明動(dòng)物機(jī)體發(fā)生了不同程度的免疫反應(yīng)。PVC-Dot-ELISA檢測(cè)結(jié)果表明六只小鼠均產(chǎn)生了有效效價(jià)。篩選

3、純化蛋白的結(jié)果表明用超濾離心管分離的大于50 kDa的囊液蛋白為最終純化蛋白，且該純化蛋白濃度很高，SDS-PAGE分析顯示，該目的蛋白分子量在63 kDa附近，與預(yù)期一致。建立的阻斷ELISA檢測(cè)方法結(jié)果顯示，純化囊液蛋白的最佳包被濃度為5μg/mL，一抗最佳稀釋度為1:800，最佳包被條件是4℃/過(guò)夜，最佳封閉條件為37℃/3h，二抗最佳稀釋比例和反應(yīng)條件為1:5000，37℃，反應(yīng)30min。特異性分析顯示建立的阻斷 ELISA檢