葡萄原花青素B2抑制RPE細(xì)胞光氧化損傷的研究.pdf

1、人眼視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）細(xì)胞在維持視網(wǎng)膜和感光細(xì)胞的正常生理功能中起著重要作用?？梢?jiàn)光會(huì)導(dǎo)致RPE細(xì)胞光氧化損傷，損傷嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起年齡相關(guān)黃斑退行性病變（age-related macular degeneration，AMD）。葡萄中富含原花青素B2，是目前發(fā)現(xiàn)的最有效的自由基清除劑之一，且無(wú)明顯毒副作用，可作為膳食補(bǔ)充劑，在抑制RPE細(xì)胞光氧化損傷以及延緩AMD方面具有很大的

2、應(yīng)用潛力。本課題主要研究葡萄原花青素B2（grape procyanidins B2，GPB2）抑制藍(lán)光誘導(dǎo) RPE細(xì)胞氧化損傷的作用，并進(jìn)一步探究 GPB2對(duì) RPE細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑、線粒體凋亡途徑的影響。主要研究結(jié)果如下：
　　1. GPB2有效提高光誘導(dǎo)氧化損傷RPE細(xì)胞的活性：通過(guò)細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，藍(lán)光照射RPE細(xì)胞損傷后，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，細(xì)胞活性明顯減少（p<0.05）；用濃度為0.5μM、1μM、5μM、10μM

3、的GPB2處理光氧化損傷的RPE細(xì)胞，RPE細(xì)胞活性顯著提高（p<0.05）。
　　2. GPB2顯著抑制光誘導(dǎo)RPE細(xì)胞氧化損傷引起的凋亡，且呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系：通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，光氧化損傷的RPE細(xì)胞凋亡率為36％，用0.1μM的GPB2處理后，細(xì)胞凋亡率降低到24.9%，這表明葡萄原花青素B2在一定濃度范圍內(nèi)能夠抑制藍(lán)光誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞凋亡；
　　3. GPB2降低光氧化損傷RPE細(xì)胞內(nèi)的氧化水

4、平：藍(lán)光照射后，RPE細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）的水平顯著提高（p<0.05）；一定濃度GPB2處理光氧化損傷RPE細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生量相對(duì)于光氧化損傷組的顯著降低（p<0.05），同時(shí)抗氧化酶SOD、GSH活力顯著提高（p<0.05）；
　　4. GPB2抑制光氧化損傷 RPE細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ER stress）凋亡

5、途徑：GPB2處理RPE細(xì)胞后，顯著降低ER stress相關(guān)信號(hào)蛋白（CHOP，p-elf2α，p-IRE1α）的表達(dá)（p<0.05）。
　　5. GPB2抑制光氧化損傷RPE細(xì)胞的線粒體凋亡途徑：GPB2處理RPE細(xì)胞后，顯著抑制線粒體中細(xì)胞色素C（cytochrome c，Cyto C）的釋放和線粒體凋亡相關(guān)蛋白Casepase-9和Casepase-3磷酸化，上調(diào)Bcl-2/Bax比值（p<0.05）。
　　結(jié)論：G