葡萄籽原花青素抗輻射損傷作用的實驗研究.pdf

1、目的：輻射損傷的自由基學說認為，輻射可導致機體體內(nèi)產(chǎn)生大量的活性氧自由基，這些高活性自由基能夠損傷細胞DNA、生物膜以及其它生物大分子，造成細胞過氧化損傷、細胞功能異常、細胞周期紊亂以及細胞壞死與凋亡等一系列病理損傷。葡萄籽原花青素(GSP)是一類從葡萄籽中提取出的天然植物多酚化合物，具有無毒、高效、高生物利用率等優(yōu)點，是迄今為止人類從自然界中所發(fā)現(xiàn)的最強有力的天然抗氧化劑之一，具有極強的抗氧化及清除自由基活性，同時還具有細胞保護、抗腫

2、瘤等其它一系列優(yōu)良的生物藥理學作用，但有關GSP對輻射損傷的保護作用研究尚少。本課題通過GSP及其與酪蛋白聯(lián)合應用，對輻射損傷動物機體抗氧化功能、免疫保護作用、腸粘膜屏障功能、動物存活率及機體營養(yǎng)狀態(tài)影響的實驗研究，為GSP在輻射損傷的臨床應用及營養(yǎng)制劑的研制開發(fā)提供實驗依據(jù)。 方法：Wistar大鼠80只，體重180～220g，隨機分為正常對照組、照射對照組、GSP組、GSP+酪蛋白聯(lián)合組，每組20只，雌雄各半。正常對照組和照

3、射對照組喂食常規(guī)飼料，GSP組在常規(guī)飼料基礎上添加1％的GSP，聯(lián)合組添加1％的GSP和5％的酪蛋白，各組自由進食。喂養(yǎng)至第10天，除正常對照組外，其余大鼠均接受7Gy的60Co-γ全身一次性照射，照射后第7d，各組隨機各取存活大鼠6只宰殺取材，利用TPA法、比色法、鱟試劑法、免疫組化等方法以及流式細胞儀等儀器，檢測血清MDA、SOD、WBC、血清內(nèi)毒素水平、脾細胞凋亡率和脾細胞Bcl-2蛋白表達，并對腸粘膜做掃描電鏡觀察。 另

4、取昆明種小鼠80只，體重18～22g，雌雄各半，按上述方法分組和喂養(yǎng)，GSP組飼料含GSP為0.5％，聯(lián)合組含GSP0.5％、酪蛋白3％。喂養(yǎng)至第10天除正常對照組外，其余小鼠均接受6Gy的60Co-γ全身一次性照射，繼續(xù)喂養(yǎng)，觀察照射后30d存活率。 結(jié)果：1.血清MDA水平(nmol/m1)：正常對照組、照射對照組、GSP組、聯(lián)合組分別為6.20±0.84、11.43±1.27、9.05±0.95、8.57±0.95，GSP

5、組與聯(lián)合組顯著和非常顯著低于照射對照組(P＜0.05，P＜0.01)；血清SOD活力水平(U/ml)：上述四組分別為241.7±12.3、172.1±9.3、196.6±10.5、210.7±11.7，GSP組與聯(lián)合組均非常顯著高于照射對照組(P＜0.01)； 2.外周血WBC(×109/L)：上述四組分別為9.2±0.83、0.35±0.10、0.65±0.18、0.85±0.37；脾臟指數(shù)(g/Kg)：四組分別為2.48±0

6、.22、1.41±0.13、1.61±0.14、1.63±0.14。外周血WBC和脾臟指數(shù)，GSP組、聯(lián)合組均顯著高于照射對照組(P＜0.05)；脾細胞凋亡率(％)：四組分別為6.5±1.7、46.8±5.8、35.3±2.4、27.9±1.8，GSP組與聯(lián)合組均非常顯著低于照射對照組(P＜0.01)，并且GSP組與聯(lián)合組之間也存在顯著差異(P＜0.05)；Bcl-2蛋白表達狀況：免疫組化檢測顯示，GSP組與聯(lián)合組脾細胞Bcl-2蛋白表

7、達顯著增強； 3.血清內(nèi)毒素水平(Eu/ml)：四組分別為75.7±8.7、343.5±35.0、293.0±22.0、261.5±24.7，GSP組與聯(lián)合組顯著和非常顯著低于照射對照組(P＜0.05，P＜0.01)；掃描電鏡觀察可見：照射對照組腸絨毛排列雜亂，絨毛萎縮變薄變禿，高倍鏡下可見絨毛普遍發(fā)生潰瘍，而GSP組與聯(lián)合組損傷情況要明顯好于照射對照組； 4.大鼠輻射后7天存活率：四組分別為100％、55％、65％、9

8、0％，GSP組與聯(lián)合組分別比照射對照組提高了18.2％和63.6％；小鼠輻射后30天存活率：四組分別為100％、35％、45％、55％，GSP組與聯(lián)合組分別比照射對照組提高了28.6％和57.1％； 5.體重損失率：大鼠輻照后第7天與照射前相比，照射對照組、GSP組和聯(lián)合組體重損失率分別為19.8±2.1％、18.4±2.2％、12.9±1.2％，聯(lián)合組體重損失率非常顯著低于照射對照組和GSP組(P＜0.01)；血清TP水平(g

9、/L)：四組分別為72.3±7.3、52.8±4.2、61.3±4.7、63.8±5.2，GSP組和聯(lián)合組均顯著高于照射對照組(P＜0.05)；血清Alb水平(g/L)：四組分別為28.7±3.1、13.2±1.8、16.0±2.0、19.7±2.2，而聯(lián)合組顯著高于照射對照組和GSP組(P＜0.05)； 6.血清GPT、GOT測定結(jié)果表明，雖然照射后7d照射對照組、GSP組和聯(lián)合組血清GPT、GOT均顯著高于正常對照組，但GS

10、P組與聯(lián)合組均顯著低于照射對照組(P＜0.05)。 結(jié)論1.GSP能顯著提高放射損傷動物機體的抗氧化能力，有助于減輕自由基對輻射機體的過氧化損傷。 2.GSP可顯著改善輻射動物外周血白細胞水平和減輕輻射對脾臟的損害，因此具有抗輻射免疫保護作用，而GSP提高脾細胞Bcl-2蛋白表達和抑制脾細胞凋亡是其減輕脾臟輻射損傷的重要機制之一。 3.GSP可減輕動物腸粘膜結(jié)構(gòu)的急性輻射損傷，對輻射動物的腸粘膜屏障具有明顯的保護