鹽酸氨溴索注射液對百草枯中毒致急性肺損傷大鼠肺表面活性物質(zhì)蛋白-D的研究.pdf

1、目的：百草枯(paraquat，PQ)：是我國農(nóng)村廣泛使用一種除草劑，對人毒性極大，因無特效解毒藥，故死亡率很高。目前世界上已有許多國家已禁止使用百草枯。百草枯中毒后損傷的主要臟器是肺，早期可導致急性肺損傷，晚期可致肺纖維化，患者最終出現(xiàn)呼吸衰竭。百草枯中毒所致急性肺損傷的發(fā)病機制還不清楚，一般認為百草枯中毒后在體內(nèi)形成過多陽離子、超氧陰離子及羥自由基，誘導脂質(zhì)過氧化反應，直接損害肺泡細胞，使肺泡上皮細胞分泌、合成肺泡表面活性物質(zhì)減少有

2、關(guān)。目前百草枯中毒的治療方法主要包括洗胃、清除毒物、清除氧自由基、使用免疫抑制劑及激素，行血液透析、血液灌流。
　　鹽酸氨溴索是一種廣泛應用治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物，具有祛痰功能。近年發(fā)現(xiàn)鹽酸氨溴索還有抗炎和促進肺泡Ⅱ型細胞分泌，合成肺泡表面相關(guān)活性物質(zhì)作用。SP-D是肺泡Ⅱ型細胞合成、分泌肺泡表面相關(guān)活性物質(zhì)蛋白，人們發(fā)現(xiàn)SP-D在急性肺損傷中起著極重要作用。
　　我們設計本實驗用來觀察鹽酸氨溴索對大鼠百草枯中毒急性肺損傷S

3、P-D及各相關(guān)指標的影響，并評價鹽酸氨溴索對百草枯中毒治療作用。
　　方法：將120只體重在200-250g之間的雄性大鼠，隨機分為三個實驗組：(1)生理鹽水組(NS組，n=24)腹腔每日注入等容量0.9％生理鹽水。(2)百草枯中毒組(PQ組，n=48)：以30mg/kg腹腔注入0.5％百草枯稀釋液。(3)鹽酸氨溴索治療組(AT組，n=48)：百草枯染毒后每日腹腔注入鹽酸氨溴索液，按40mg/kg注入。PQ組與AT組再分別按時間點

4、隨機分為四組，分別為1d，3d，5d，7d實驗組，每組均為12只。NS組也按1d，3d，5d，7d四個時間點隨機分為四組，各時間點均為6只。抽取股靜脈血用來檢測WBC和PMN百分比。抽取股動脈血測定動脈血氧分壓(PaO2)。取大鼠的左肺行眥染色和免疫組化，用于觀察肺組織形態(tài)學變化和SP-D在肺組織表達。右肺用western blot法檢測肺組織中SP-D的含量。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，采用單因素方差分析進行組間比較，并運用

5、均數(shù)±標準差對數(shù)據(jù)進行描述。以P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1大鼠注射百草枯后及鹽酸氨溴索治療后表現(xiàn)大鼠注射百草枯后，食欲減退，呼吸急促，行動遲緩，反應遲鈍，部分大鼠口、鼻有少量粘液性分泌物。百草枯中毒大鼠經(jīng)鹽酸氨溴索治療后，癥狀減輕。NS組大鼠無異常表現(xiàn)。
　　2靜脈血液WBC計數(shù)和PMN百分比變化
　　2.1靜脈血液中WBC計數(shù)的變化
　　NS組靜脈血液WBC計數(shù)各時間點均無明顯差異(

6、P>0.05)。PQ組各相應時間點均顯著高于NS組(P<0.01)。AT組WBC計數(shù)也增高，經(jīng)鹽酸氨溴索治療后下降。但各個相應時間點仍高于NS組(P<0.01)，第一天AT組與PQ組無明顯差異(P>0.05)，第3、5、7天WBC計數(shù)均低于PQ組(P<0.01)。
　　2.2靜脈血液中PMN百分比的變化
　　NS組PMN百分比各個時間點無明顯差異(P>0.05)。PQ組PMN百分比第一天即開始升高，各個相應時間點與NS組相比

7、均明顯增高(P<0.01)。AT組第一天于PQ組無明顯差異(P>0.05)。第5、7天明顯下降(P<0.01)。但仍明顯高于NS組各時間點(P<0.01)。
　　2.3動脈血液中PaO2的變化
　　NS組動脈血液中PaO2各個時間點無明顯差異(P>0.05)。PQ組動脈血液中PaO2逐漸下降，各相應時間點均明顯低于NS組(P<0.01)。AT組PaO2各相應時間點均低于NS組(P<0.01)。與PQ組相比：第1天兩者無明顯差

8、異(P>0.05)，第3、5、7天AT組PaO2開始增高，兩者相比有顯著差異(P<0.01)。
　　3肺組織病理形態(tài)學觀察
　　3.1肺的大體標本觀察
　　NS組肺標本色澤、大小形態(tài)正常，質(zhì)地柔軟，表面光滑，無出血及炎性滲出物，無充血水腫，切面無滲出物。PQ組肺標本呈暗紅色，體積增大，質(zhì)地韌，肺組織表面腫脹充血，部分肺葉可見點狀出血，肺組織切面有淺紅色液體滲出。AT組肺標本較百草枯中毒組顏色淡，充血水腫輕，部分肺葉可見

9、點片狀出血，切面有少許滲液。
　　3.2 HE染色光鏡觀察
　　NS組可見肺泡結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，分布均勻，肺泡腔內(nèi)無炎性細胞侵潤。PQ組可見肺泡和肺間質(zhì)充血水腫，肺泡間隔增厚并有中性粒細胞侵潤，肺泡腔內(nèi)粉紅色滲液。嚴重時可見肺泡和肺間質(zhì)充血水腫明顯，部分肺泡萎陷，纖維母細胞增生，肺泡腔有大量血性滲液。AT組與PQ相比，肺泡和肺間質(zhì)充血水腫均較輕。
　　4免疫組織化學染色和western blot方法結(jié)果
　　4

10、.1免疫組化觀察肺組織中SP-D的表達
　　4.1.1光鏡下觀察SP-D在細胞膜和細胞漿中的表達。NS組可見細胞膜和細胞漿中SP-D顆粒，PQ組SP-D在肺組織表達明顯減弱。AT組在肺組織表達較PQ組增強。
　　4.1.2 NS組SP-D陽性細胞數(shù)各時間點無明顯差異(P>0.05)。PQ組與NS組各相應時間點相比，陽性細胞數(shù)明顯降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。AT組SP-D陽性細胞數(shù)各相應時間點均低于NS組有明顯差異(P

11、<0.01)；與PQ組相比，第1天，兩者無明顯差異(P>0.05)，第3、5、7天AT組SP-D陽性細胞數(shù)各相應時間點較PQ組均增高，兩者有顯著差異(P<0.01)。
　　4.2 western blot法檢測SP-D在肺組織表達
　　NS組肺組織SP-D含量在各時間點無明顯變化。PQ組肺組織SP-D含量與NS組相比，各時間點SP-D含量均明顯下降，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。AT組肺組織SP-D含量第1、3天較PQ組相比

12、無顯著差異(P>0.05)，經(jīng)鹽酸氨溴索治療后，第5、7天兩者有明顯差異(P<0.01)。AT組較NS組有較大差異(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1大鼠百草枯中毒后，靜脈血WBC計數(shù)、多形核PMN百分比均明顯增高，PaO2持續(xù)下降，說明百草枯中毒誘導炎癥反應引起急性肺損傷主要因素之一。
　　2通過免疫組化和Western blot法，發(fā)現(xiàn)百草枯中毒后SP-D在肺組織表達減弱，肺組織SP-D含量也明顯降低，說明百草枯