殼寡糖聚合度與小鼠腸道對(duì)殼寡糖吸收率的關(guān)系.pdf

1、殼寡糖又稱寡聚氨基葡糖(Chito-oligosaccharide,COS),是指由2-10個(gè)氨基葡萄糖以β-1,4糖苷鍵連接而成的低聚糖,通常由海洋動(dòng)物所含豐富的甲殼素脫乙?；?再通過糖苷酶降解獲得。殼寡糖是天然糖中唯一大量存在的堿性氨基聚糖,其不但具有水溶性好、安全無毒、易被吸收等特點(diǎn),且有多種生物活性:如增強(qiáng)細(xì)胞和體液免疫,抑制腫瘤細(xì)胞生長增值,調(diào)控血糖血脂,增加腸道有益菌群數(shù)量等。
　　 殼寡糖的生物活性主要包括以下兩個(gè)

2、途徑:首先,殼寡糖進(jìn)入腸道后,抑制大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌等腸道致病菌,增加雙歧桿菌等益生菌群數(shù)量,從而發(fā)揮腸道益生菌作用。其次,殼寡糖進(jìn)入腸道后被吸收入血,到達(dá)相應(yīng)靶器官,發(fā)揮免疫作用、調(diào)節(jié)血糖以及抑制腫瘤生長增值。
　　 目的:目前文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于殼寡糖功能的研究,多數(shù)是體外細(xì)胞培養(yǎng)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來直接檢測殼寡糖作用后的效能,然而,究竟殼寡糖進(jìn)入消化道后吸收程度如何,其中有多少劑量的殼寡糖被吸收入血到達(dá)靶器官發(fā)揮降糖,調(diào)節(jié)免疫

3、,抗癌的作用,多少劑量在腸道中發(fā)揮調(diào)節(jié)菌群作用從而間接調(diào)節(jié)免疫,抑制腫瘤細(xì)胞生長的功效呢,目前文獻(xiàn)還沒有報(bào)道。本課題的目的是不僅追蹤殼寡糖進(jìn)入消化道后的路徑,且比較分子量大的殼寡糖和小分子量的殼寡糖在入血和入腸的比例有無變化,是否小分子量殼寡糖被吸收入血量多而留在腸道內(nèi)量少,大分子量殼寡糖吸收入血量少而留在腸道內(nèi)量多?本研究試圖闡述殼寡糖作用后具體的主要途徑,為深入研究殼寡糖的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:首先用蝸牛酶將殼

4、聚糖水解成聚合度不同的殼寡糖,并通過聚丙烯酰胺凝膠層析柱(Bio-Gel P-4凝膠)將不同聚合度的殼寡糖分開,分別收集聚合度為1-3,8-11的殼寡糖,并用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記,再通過聚丙烯酰胺凝膠層析柱(Bio-Gel P-2/P-4)將游離的FITC除去,隨后對(duì)兩組禁食24小時(shí)的小鼠分別用FITC標(biāo)記的大分子量和小分子量的殼寡糖灌胃。1小時(shí)后取血清和小腸,經(jīng)分離水溶成分后,通過熒光分光光度計(jì)檢測血清樣品和腸溶物樣品中熒光

5、的強(qiáng)度,進(jìn)而確定殼寡糖是否被吸收入血,以及入血和直接從腸道排出的比例,從而驗(yàn)證殼寡糖的入血比例是否和聚合度有關(guān)。最后將腸溶物或血清重新通過聚丙烯酰胺凝膠層析柱(Bio-Gel P-4凝膠),確認(rèn)FITC-COS并未在消化道內(nèi)降解。
　　 結(jié)果:(1)通過改變酶解時(shí)間,蝸牛酶可以將殼聚糖水解成不同聚合度的殼寡糖。利用Bio-Gel P-4聚丙烯酰胺凝膠層析柱可以將不同聚合度的殼寡糖分離成具有一定聚合度范圍的殼寡糖。(2)FITC能

6、夠有效標(biāo)記殼寡糖,并且利用Bio-GelP-2/P-4聚丙烯酰胺凝膠層析柱可以很好的分離出游離的FITC。(3)用FITC標(biāo)記的大、小分子量的殼寡糖給小鼠灌胃,從血清和腸溶物中均檢測到熒光強(qiáng)度,兩者比值平均值分別為5.65:1和9.84:1。(4)腸溶物液和血液通過聚丙烯酰胺凝膠層析柱后,在FITC-COS洗脫體積處檢測到一個(gè)分子量大于FITC的熒光峰,證明FITC-COS并未在消化道內(nèi)降解。
　　 結(jié)論:FITC-COS可以在