中樞M受體參與毒血癥大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞激活及細(xì)胞因子分泌的研究.pdf

1、目的：通過研究中樞M受體對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖、活化的影響及對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠外周、腦內(nèi)炎癥因子水平的影響，進(jìn)而探討腦內(nèi)M型膽堿能受體與外周、中樞炎癥反應(yīng)的關(guān)系和可能機(jī)制。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為二部分
　　 1.側(cè)腦室注入M受體激動(dòng)劑/拮抗劑對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的影響雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為4組：空白組(N組，n=6)，分別于外周靜脈和側(cè)腦室注射生理鹽水；對(duì)照組(C組，n=6)，外周靜脈注射

2、LPS，側(cè)腦室注入生理鹽水；拮抗劑組(A組，n=6)：外周注射LPS，側(cè)腦室注入M受體拮抗劑阿托品；激動(dòng)劑組(M組，n=6)，外周注射LPS，側(cè)腦室注入M受體激動(dòng)劑毒蕈堿。于建模前1h側(cè)腦室干預(yù)給藥或生理鹽水，建模后4h取大鼠大腦，采用免疫組化法測定海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)變化。
　　 2.側(cè)腦室注入M受體激動(dòng)劑/拮抗劑對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腦內(nèi)及外周炎癥因子分泌的影響分組同第一部分，各組大鼠于建模前1h側(cè)腦室干預(yù)給藥或生理鹽水

3、，建模后4h于腹主動(dòng)脈取血約5ml，離心后取上清，采用ELISA法檢測TNF-α及IL-6的表達(dá)。取血同時(shí)，斷頭取兩側(cè)海馬，組織勻漿后取上清，先行BCA蛋白定量，再用ELISA法檢測海馬組織INF-α及IL-6的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫組化結(jié)果N組大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(GFAP)有少量表達(dá)，但染色淺，胞體小，分支少而細(xì)長；C組大鼠海馬GFAP染色加深，胞體肥大，分支增多變粗；M組能有效抑制LPS誘導(dǎo)的星

4、形膠質(zhì)細(xì)胞的活化；A組則沒有這種效應(yīng)。
　　 圖像分析顯示，與N組相比，其他各組大鼠海馬GFAP陽性細(xì)胞數(shù)及平均光密度值顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與C組相比，M組大鼠海馬GFAP陽性細(xì)胞數(shù)及平均光密度值顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組與C組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.腦組織及外周血ELISA結(jié)果C組與N組相比，腦組織及外周血TNF-α、IL-6表達(dá)明顯增加，差異顯著

5、(P<0.05)；M組與C組比較，腦組織及外周血TNF-α、IL-6表達(dá)顯著減少，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；A組與C組相比，腦組織及外周血TNF-α、IL-6表達(dá)無明顯變化(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.LPS可激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，使其GFAP表達(dá)增加，側(cè)腦室內(nèi)注射M受體激動(dòng)劑毒蕈堿能夠有效抑制LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，表現(xiàn)為GFAP陽性細(xì)胞數(shù)及平均光密度值的顯著減少。而側(cè)腦室注射M受體拮抗劑阿