溫敏半矮生型桃PpTssd基因的精細定位及分子鑒定.pdf

1、桃Prunus persica(L.)Batsch]新梢生長量大，樹冠濃密，修剪量大，易造成樹體營養(yǎng)浪費，增加生產(chǎn)成本，培育有限矮化、管理省工、適宜密植的生長型是桃遺傳改良目標(biāo)之一。本研究在明確表型響應(yīng)溫度和已有研究基礎(chǔ)上（定位區(qū)間270Kb），以溫敏半矮生型桃為載體，開展內(nèi)源BR響應(yīng)溫度變化、基因精細定位、雜種后代分子鑒定及候選區(qū)基因的SNP、InDel和結(jié)構(gòu)變異分析等研究。主要研究結(jié)果如下:
　　系統(tǒng)研究了溫度對溫敏半矮生型和

2、普通生長型桃節(jié)間長度與內(nèi)源油菜素甾醇的影響。采用雙溫度法（22℃和30℃）進行表型鑒定，‘09-8-25’ב中桃白玉’雜交獲得F1代275株實生苗，22℃時表現(xiàn)為節(jié)間長度極短，呈極度矮化狀態(tài)，而30℃時節(jié)間伸長，與普通生長型節(jié)間無明顯差異的植株為溫敏半矮生型(Temperature Sensitive Semi-dwarf Peach，PpTssd);22℃與30℃節(jié)間長度均較長且無明顯差異的植株為普通生長型(Standard Typ

3、e，ST)。研究不同溫度(22℃、26℃和30℃)對PpTssd型植株莖尖油菜素甾醇水平的影響發(fā)現(xiàn)，在各溫度處理的植株莖尖中均未檢測到油菜素內(nèi)酯成分;油菜素甾酮含量在3種溫度處理條件下差異不明顯，30℃時油菜素甾酮的鮮重含量僅為22℃的1.329倍;香蒲甾醇含量在各溫度處理間具有顯著差異，30℃處理條件下的香蒲甾醇含量是22℃的2.917倍，香蒲甾醇可能與突變性狀有關(guān)。
　　建立了一種高通量桃DNA提取方法。以‘09-1-112’

4、(PpTssd)ב中油桃8號’(ST)雜交F1代500株實生苗為載體，利用1.2mL八聯(lián)排管結(jié)合改良CTAB法，提取桃幼嫩葉片中的基因組DNA。經(jīng)檢測，提取的DNA濃度范圍約25ng·μL-1～200ng·μL-1，OD260nm/OD280nm約為1.81～1.98，純度和完整度較高。利用高分辨率熔解曲線進行驗證，Pp Tssd型和普通生長型呈現(xiàn)明顯不同的峰型，分辨率高;聚丙烯酰胺凝膠電泳的驗證結(jié)果顯示PCR擴增穩(wěn)定，條帶清晰，多態(tài)

5、性較高;因此，提取的DNA可用于基于SNP/InDel標(biāo)記的基因分型。利用本研究方法，每人每天可以完成1000個樣品的DNA提取，可用于后續(xù)目的基因精細定位。
　　基于雙親（‘09-8-25’中桃白玉’）重測序?qū)pTssd基因進行了精細定位。利用上述方法提取‘09-8-25’ב中桃白玉’雜交F1代275株實生苗基因組DNA，基于雙親深度測序，根據(jù)親本的基因型與表型一致，開發(fā)SNP/InDel標(biāo)記共38對，其中16對與目標(biāo)性狀連

6、鎖，將目的基因定位至Pp03-SNP_3480000與Pp03-SNP_3553771兩標(biāo)記之間，物理距離約74Kb，共包含8個轉(zhuǎn)錄本，7個候選基因。
　　基于熒光標(biāo)記SSR毛細管電泳，對雜交后代6株重組單株進行分子鑒定。經(jīng)檢測，16對熒光SSR引物中，10對在雙親‘09-8-25’、‘中桃白玉’具有多態(tài)性差異，多態(tài)率為62.5％。毛細管電泳分析結(jié)果顯示，6個交換單株均為‘09-8-25’ב中桃白玉’雜交F1代，分子鑒定率為10