植物提取物Embelin對小鼠肥胖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景：肥胖是一種代謝性疾病，由多種因素引起。其特點是體內(nèi)脂肪細(xì)胞體積的增大和細(xì)胞數(shù)量的增加，由此導(dǎo)致脂肪質(zhì)量占身體總質(zhì)量的百分比異常增高，并且脂肪過多沉積在附睪周圍、腸系膜和腎周等部位[1]。肥胖會使多種疾病的患病風(fēng)險明顯增加，如心腦血管疾病、脂肪肝、糖尿病等[2]。恩貝酸（embelin）是從植物中提取的一種醌類化合物。已有文獻(xiàn)研究表明對于高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肥胖模型，Embelin能夠抑制肥胖和由于肥胖導(dǎo)致的高血脂和氧化應(yīng)激[3]。本

2、研究主要探討了Embelin是否通過抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化分化來抑制肥胖，并初步探究其機(jī)制。
　　方法：1、骨髓基質(zhì)細(xì)胞系C3H10T1/2和間充質(zhì)干細(xì)胞系ST2分別用二甲基亞砜（DMSO）和不同濃度的Embelin處理后，用成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞成脂分化，通過油紅O染色檢測分化程度，通過qRT-PCR和Western blotting從mRNA豐度和蛋白表達(dá)水平檢測成脂分化標(biāo)記基因的水平，從而確定Embelin

3、對骨髓基質(zhì)細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化過程的影響；2、骨髓基質(zhì)細(xì)胞C3H10T1/2分別用DMSO和Embelin處理，通過細(xì)胞免疫熒光檢測β-連環(huán)蛋白（β-catenin）入核的改變，從而確定Embelin對wnt通路的作用；3、C3H10T1/2細(xì)胞分別用二甲基亞砜（DMSO）和不同濃度的Embelin處理后，成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)成脂，提取核蛋白，通過Western blotting檢測細(xì)胞核中β-catenin和T細(xì)胞因子（T cell fa

4、ctor, TCF)-4蛋白水平，確定Embelin對wnt通路的作用；4、C3H10T1/2細(xì)胞分別用二甲基亞砜（DMSO）或10μM的Embelin處理后，qRT-PCR檢測Wnt通路配體Wnt10b、共受體Lrp5、抑制因子Sfrp1和Dkk1的mRNA水平，以此確定Embelin影響Wnt通路的機(jī)制；5、雄性C57BL/6小鼠，4周齡，用高脂飼料喂養(yǎng)構(gòu)建小鼠肥胖模型，同時皮下注射不同劑量的Embelin，造模過程中記錄各組小鼠體

5、重，成模后用骨密度儀測量體脂率，取血清檢測葡萄糖、甘油三酯、游離脂肪酸和總膽固醇水平，以此確定Embelin對肥胖的影響；6、實驗組與對照組小鼠處死后，分離各個部位脂肪組織，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄，通過qRT-PCR檢測不同部位脂肪組織中成脂分化標(biāo)記基因和關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平；7、取實驗組與對照組小鼠的脂肪組織，制作石蠟切片，HE染色，觀察脂肪組織中脂肪細(xì)胞的體積。
　　結(jié)果：1、油紅O染色表明Embelin對骨髓基質(zhì)細(xì)胞系C3H1

6、0T1/2和ST2成脂分化有抑制作用，qRT-PCR和Western blotting結(jié)果表明Embelin能抑制成脂分化標(biāo)記基因過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）、CCATT增強結(jié)合蛋白（CCAAT enhancer binding proteinα, C/EBP-α）、脂肪細(xì)胞表征因子aP2（Adipocyte fatty acid-bi

7、nding Protein2)和Adipsin的表達(dá)，且有劑量依賴效應(yīng)；2、細(xì)胞免疫熒光表明在C3H10T1/2中Embelin可以促進(jìn)β-catenin入核，提取核蛋白，Western blotting結(jié)果表明核內(nèi)β-catenin和TCF-4水平上升，且有劑量依賴效應(yīng)，說明Embelin可以激活wnt通路。C3H10T1/2細(xì)胞經(jīng)Embelin處理后，qRT-PCR檢測Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá)，包括Wnt通路的配體wnt10b、共受

8、體Lrp5、Wnt通路抑制因子sfrp1和Dkk1，發(fā)現(xiàn)Dkk1的mRNA水平明顯下降，說明Embelin下調(diào)Wnt通路抑制因子Dkk1的表達(dá)，進(jìn)而激活Wnt通路；3、飼喂高脂飼料組小鼠較飼喂普通飼料組小鼠體重明顯上升，造模成功，而高脂飼料喂養(yǎng)同時皮下注射Embelin組的體重較高脂同時注射溶劑組明顯下降，骨密度儀檢測體脂率也表明Embelin能夠明顯降低脂肪占體重的百分比，且有劑量依賴效應(yīng)，表明Embelin能夠抑制小鼠肥胖；測定血清

9、中葡萄糖、游離脂肪酸、總膽固醇和甘油三酯水平，結(jié)果表明Embelin組均比溶劑組低，進(jìn)一步說明Embelin能夠抑制小鼠肥胖；4、取各組小鼠脂肪組織制作石蠟切片，HE染色表明，注射Embelin后，小鼠的脂肪細(xì)胞體積變小，說明Embelin能夠在體內(nèi)抑制脂肪組織中脂肪細(xì)胞的肥大；5、提取各組小鼠脂肪組織總RNA，用qRT-PCR檢測成脂標(biāo)記基因和關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，注射Embelin組aP2、C/EBP-α、PPARγ和Adipsin表