鉛和鄰苯二甲酸二丁酯聯(lián)合暴露對小鼠和斑馬魚胚胎的毒性及初步機制研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟的迅速發(fā)展，環(huán)境問題日益突出。鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）常被作為增塑劑和添加劑應用于塑料、農藥和化妝品等產品的生產中；鉛（Pb）是一種廣泛應用且普遍存在于環(huán)境中的重金屬污染物。Pb和DBP在大氣、水體、土壤和食物中均有一定程度的檢出，兩者可同時暴露于人體，對人類健康產生嚴重危害。目前針對兩者的研究多為單一暴露的毒性研究，而關于兩者聯(lián)合暴露毒性和作用機制的研究鮮見相關報道。因此，本文選取初斷乳小鼠和斑馬魚胚胎為研究對象，通過研究小

2、鼠及斑馬魚胚胎相關指標的變化情況，初步探討Pb和DBP的聯(lián)合暴露的毒性及其作用機制，為聯(lián)合暴露的研究提供基礎，該研究對人類健康具有重要意義。主要研究結果如下：
　　第一部分 Pb和DBP聯(lián)合暴露對初斷乳小鼠學習記憶能力的影響及其初步機制
　　Pb（50 mg/L）和DBP（10和250 mg/kg b. w.）單獨及聯(lián)合對3周齡小鼠暴露8周，其中DBP采用灌胃暴露，Pb通過飲水暴露。采用行為學、酶學和蛋白印跡等方法，分析Pb

3、和DBP聯(lián)合暴露對小鼠學習記憶能力的影響，初步探討其作用機制。
　　1、Morris水迷宮實驗發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，各暴露組小鼠的逃逸潛伏期顯著增加，平均穿越平臺的次數(shù)顯著減少（p<0.05），說明Pb和DBP單獨及聯(lián)合暴露均對小鼠學習記憶能力有一定的損傷作用。
　　2、小鼠組織中Pb含量測定結果表明，Pb在小鼠各組織中均有一定程度的積累，且在腦組織中尤為明顯。說明腦是Pb作用的靶器官，Pb可在腦組織中大量蓄積，影響小鼠學

4、習記憶能力。
　　3、酶學和蛋白印跡分析表明：① Pb和DBP聯(lián)合暴露誘導了小鼠腦組織中NOS的過量表達，使得NO含量顯著增加；同時SOD的活力下降，MDA水平上升；誘導大腦組織脂質過氧化的發(fā)生，造成大腦細胞損傷。② Pb和DBP聯(lián)合暴露致小鼠腦組織中AChE活性顯著增高，使得膽堿能神經(jīng)元活化，破壞了ACh的正常的代謝平衡，造成小鼠神經(jīng)損傷。③ Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過上調小鼠海馬中Caspase-3蛋白的表達和Bax/Bcl-

5、2的比值，誘導小鼠海馬細胞發(fā)生凋亡。
　　第二部分 Pb和DBP聯(lián)合暴露對斑馬魚胚胎的毒性及其初步作用機制
　　以Pb（0.01和1 mg/L）和DBP（0.005和0.5 mg/L）單獨及聯(lián)合對斑馬魚胚胎暴露120h。采用熒光定量PCR測定斑馬魚胚胎神經(jīng)、細胞凋亡、發(fā)育、免疫和抗氧化相關基因表達變化情況，研究Pb和DBP暴露對斑馬魚胚胎的毒性作用，并對其機制進行初步探討。
　　1、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導斑馬魚胚

6、胎中NRIA、NR2A、NRAD和c-fos基因表達水平上升，bcl-2基因表達水平下降，說明兩者聯(lián)合暴露可通過影響斑馬魚胚胎神經(jīng)和細胞凋亡相關基因的表達，影響斑馬魚神經(jīng)發(fā)育并導致細胞凋亡，對斑馬魚胚胎產生毒性。兩者聯(lián)合暴露無交互作用
　　2、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導斑馬魚胚胎中hsp70基因表達水平下降，cyp1a基因表達水平上升；說明Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過影響斑馬魚胚胎發(fā)育相關基因的表達，對斑馬魚胚胎產生發(fā)育毒性。兩者

7、聯(lián)合暴露無交互作用。
　　3、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導斑馬魚胚胎中IL-1β和C3B基因表達水平上升，Lyz基因表達水平下降。說明Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過影響斑馬魚胚胎免疫相關基因的表達，對斑馬魚胚胎產生免疫毒性。兩者聯(lián)合暴露無交互作用。
　　4、Pb和DBP暴露可以誘導斑馬魚胚胎中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和GPx基因表達水平上升的；說明Pb和DBP聯(lián)合暴露影響抗氧化相關基因的表達，破壞斑馬魚胚胎抗氧化系統(tǒng)平衡