一氧化碳中毒小鼠腦內(nèi)Ang-1、Ang-2及Tie-2mRNA的動(dòng)態(tài)變化及丁苯肽對(duì)其影響.pdf

1、背景：一氧化碳(Carbon monoxide，CO)是一種無色、無味、無臭、無刺激性的有毒氣體，是生活和生產(chǎn)中造成中毒性死亡最常見的窒息性氣體。它可以引起機(jī)體多個(gè)系統(tǒng)損傷，其中大腦損害最為嚴(yán)重，且有一部分急性一氧化碳中毒患者在中毒癥狀緩解、意識(shí)恢復(fù)正常后，大約經(jīng)歷2到60天表現(xiàn)正?；蚧菊５拈g歇期后，會(huì)再次出現(xiàn)一系列腦病的癥狀，稱為一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病(Delayed encephalopathy after carbon mon

2、oxide poisoning，DEACMP)。其主要表現(xiàn)為記憶受損、意識(shí)障礙、錐體外系神經(jīng)障礙、錐體系神經(jīng)損害等，是CO中毒最嚴(yán)重的類型。有關(guān)急性CO中毒和DEACMP發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，迄今為止已經(jīng)提出了許多假說，如缺血缺氧、細(xì)胞毒性損傷、再灌注損傷和自由基的形成、興奮性氨基酸的生成、凋亡機(jī)制等。其中缺血缺氧機(jī)制在CO中毒腦損傷的發(fā)生機(jī)理中占有重要地位。近年來，許多研究結(jié)果表明，缺血缺氧后，缺血周圍區(qū)域存在新生血管形成現(xiàn)象，而通過

3、血管新生可以啟動(dòng)損傷區(qū)微血管網(wǎng)重建，進(jìn)而可以改善損傷區(qū)微循環(huán)組織的血液灌流，這對(duì)CO中毒后缺血缺氧神經(jīng)元的存活具有重要意義。目前，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，腦缺血時(shí)腦內(nèi)可見新生血管形成，而CO中毒后腦血管的分子生理病理變化尚無明確報(bào)道。
　　 在新生血管生成過程中，血管生成素(Angiopoiten，Ang)家族發(fā)揮著重要作用，它可以特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞。其中家族中的Ang-1、Ang-2與血管生成密切相關(guān)，與內(nèi)皮細(xì)胞表面特異受體Tie

4、-2酪氨酸激酶結(jié)合發(fā)揮促血管生成作用。Ang/Tie-2系統(tǒng)參與血管新生的最后階段，通過干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和周細(xì)胞的相互作用促進(jìn)血管生成和重塑，在缺血等病理狀態(tài)下可作為一種關(guān)鍵的血管生成調(diào)節(jié)劑。然而CO中毒后腦組織內(nèi)Ang-1、Ang-2及Tie-2的表達(dá)變化無相關(guān)報(bào)道。
　　 丁苯肽是臨床應(yīng)用于治療急性腦卒中的一類化學(xué)新藥，可促進(jìn)新生血管生成，恢復(fù)腦血流的供應(yīng)，增加缺血區(qū)腦血流量和改善腦缺血區(qū)微循環(huán)，保護(hù)線粒體功能，改善

5、全腦缺血后的能量代謝等，涉及腦缺血病理的多個(gè)環(huán)節(jié)，但其對(duì)治療和改善急性CO中毒損傷的分子機(jī)制尚不很明確。
　　 目的：本實(shí)驗(yàn)擬在建立CO中毒小鼠模型的基礎(chǔ)上，從mRNA水平動(dòng)態(tài)觀察小鼠海馬區(qū)Ang-1、Ang-2及Tie-2表達(dá)的變化規(guī)律，探討CO中毒對(duì)小鼠腦內(nèi)血管內(nèi)皮系統(tǒng)的影響，以期能夠推測(cè)新血管形成機(jī)制在腦損傷發(fā)生后的作用，并進(jìn)一步在分子水平研究CO中毒后丁苯肽對(duì)血管生成素系統(tǒng)的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：健康雄性小鼠1

6、44只，體重(18-22)g，隨機(jī)分成空氣對(duì)照組（48只），染毒(CO)組（48只），丁苯肽組（48只），各組再分為6h、1d、2d、3d、4d、7d、14d、21d、28d，8個(gè)亞組。染毒組按照單次腹腔注射法建立CO中毒小鼠模型，空氣對(duì)照組以等量空氣腹腔注射，染毒后丁苯肽組給予丁苯肽(1ml/kg，bid)腹腔注射。相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，處死小鼠，斷頭取腦，研磨腦組織，提總RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)各組Ang-1、

7、Ang-2及Tie-2 mRNA水平表達(dá)變化。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件進(jìn)行One-WayANOVA檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、CO中毒后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達(dá)呈雙峰性增高。結(jié)果顯示：與空氣對(duì)照組相比，CO中毒后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達(dá)隨時(shí)間增加（P＜0.05），3d后達(dá)到第一個(gè)高峰（P＜0.05），4d后Ang-1、Ang-2和T

8、ie-2 mRNA表達(dá)下降，并于7d后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達(dá)達(dá)到第二個(gè)高峰(P＜0.05)，28d后表達(dá)水平恢復(fù)正常水平。小鼠腦部海馬區(qū)的Ang/Tie-2系統(tǒng)在CO中毒后表達(dá)呈規(guī)律性變化。
　　 2、小鼠CO中毒后使用丁苯肽治療，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達(dá)呈單峰性增高。與CO組相比，使用丁苯肽后，Ang-1、Ang-2和Tie-2mRNA表達(dá)未表現(xiàn)雙峰性增高，在6h后即出現(xiàn)表達(dá)

9、增高（P＜0.05），之后逐步增高于3d達(dá)到高峰。3d時(shí)，丁苯肽組Ang-1 mRNA表達(dá)量低于CO組（P＜0.05）；Ang-2和Tie-2 mRNA表達(dá)量高于CO組（P＜0.05）。3d后表達(dá)水平逐步下降，于28天恢復(fù)正常水平，沒有出現(xiàn)CO組的7d高峰。
　　 3、各組間Ang-2/Ang-1比值的變化結(jié)果顯示，空氣對(duì)照組Ang-2/Ang-1的比值在6h～28天內(nèi)保持比較低的水平，比值恒定(0.36±0.03);CO組的A

10、ng-2/Ang-1比值在6h即升高達(dá)到高峰(與空氣對(duì)照組相比，P＜0.05)，2d到達(dá)低谷，隨后比值緩慢上升于7d達(dá)到第二個(gè)高峰(與空氣對(duì)照組相比，P＜0.05)，14天時(shí)即恢復(fù)正常水平；丁苯肽組的Ang-2/Ang-1比值也在6h即升高達(dá)到高峰（與CO組相比，P＜0.05），1d～2d時(shí)達(dá)到低谷，隨后比值上升于4d～7d達(dá)到高峰(與CO組相比，P＜0.05)，28天時(shí)才恢復(fù)正常水平。
　　 結(jié)論：
　　 1、CO中毒