鵝卵泡閉鎖過程中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、浙東白鵝是中國肉鵝中著名的優(yōu)良品種，具有生長速度快、肉質(zhì)鮮美等特點，然而其就巢性強，產(chǎn)蛋量低，使品種的發(fā)展收到嚴(yán)重阻礙。對就巢期的母鵝的卵巢進行觀察，發(fā)現(xiàn)其中卵泡均發(fā)生不同程度的閉鎖，眾多研究表明，禽類卵泡中顆粒細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致其卵泡閉鎖的主要原因。哺乳動物中的研究顯示，細(xì)胞凋亡與細(xì)胞自噬密切相關(guān)，且作用機制復(fù)雜。鑒于此，本試驗試圖從自噬的角度研究卵泡閉鎖的相關(guān)機制。
　　試驗通過透射電鏡、免疫組化等方法，對正常生長卵泡和閉鎖卵泡中

2、自噬體進行定位與觀察，并采用Western blot、熒光定量PCR等技術(shù)，對自噬體標(biāo)記蛋白LC3的表達(dá)量進行檢測，判斷卵泡閉鎖是否與細(xì)胞自噬相關(guān)。同時，通過多個生化指標(biāo)的測定，檢測氧化應(yīng)激是否通過誘導(dǎo)卵泡細(xì)胞的自噬促進卵泡閉鎖。此外，在動物試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上，通過培養(yǎng)原代鵝卵泡顆粒細(xì)胞，建立氧化應(yīng)激模型，以進一步在細(xì)胞水平進行驗證。在鵝卵泡顆粒細(xì)胞氧化模型的基礎(chǔ)上，分別加入Rapamycin和3-methyladenine(3-MA)，

3、以檢測卵巢顆粒細(xì)胞中mTOR信號通路和Beclin-1信號通路，探究氧化應(yīng)激誘導(dǎo)鵝卵泡顆粒細(xì)胞自噬的作用機制。
　　研究結(jié)果表明:與生長卵泡相比，閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞中自噬水平升高（P＜0.05），氧化應(yīng)激水平升高（P＜0.05）。通過H2O2誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞建立氧化模型，檢測發(fā)現(xiàn)自噬水平顯著升高（P＜0.05）。對氧化應(yīng)激模型進行3-MA或Rapamycin共處理，發(fā)現(xiàn)Rapamycin共處理組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05